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骨髓间充质干细胞移植治疗帕金森病的实验研究 TheResearchonBone StemCells Mesenchymal as CellsforParkinson Replacement Disease 研究生：季正剑 导师：邢华 副教授 扬州大学兽医学院 二零一一年六月 季正剑：骨髓间充质干细胞移植治疗帕金森病的实验研九 骨髓间充质干细胞移植治疗帕金森病的实验研究 摘 要 帕金森病(Parkinson 性疾病，主要病变在黑质和纹状体通路，因多巴胺生成减少导致震颤麻痹。迄今 为止，PD的病因仍不清楚，未能找到确切的治疗手段，鉴于PD发病的主要病理 机制和干细胞研究的深入，细胞移植有望成为治疗该病的一种理想方法。本研究 旨在探讨骨髓间充质干细胞(Bone Stem Mesenchymal 的细胞学机制。本实验建立在BMSCs的获取、鉴定、定向诱导方法的基础上，以 PD模型大鼠为对象探讨BMSCs移植治疗PD的效果及其可能机制。 实验一 骨髓间充质干细胞的获取、鉴定 与体外向神经细胞定向诱导 [目的]体外分离培养BMSCs，纯化、扩增后鉴定其纯度和向神经元分化的可 0％ 行性。[方法]从成年大鼠股骨的骨髓中分离出BMSCs，接种于含体积分数为1 Bovine 胎牛血清(Fetal 进行细胞培养，定期换液并对细胞消化传代进行扩增，通过噻唑蓝(MTT)比色 试验检测各代细胞的活力，绘制生长曲线，将纯化后的BMSCs通过流式细胞术测 定细胞的表型对所得细胞进行鉴定；向培养基中加入5．溴脱氧尿嘧啶核苷 基作为诱导剂对细胞进行定向诱导，通过细胞形态学观察、免疫细胞化学染色法 检测神经元特征性标志nestin的表达及分化为神经元和神经胶质细胞的能力。[结 扬州火学硕士学何论文 落渐渐铺满培养瓶，传代后的细胞形态均一、融合时间缩短，细胞活力较高，且 可见大量细胞发出黄绿色荧光；免疫细胞化学染色法显示诱导后的神经元样细胞 神经干细胞的特征性标志物和神经元特异性烯醇化酶，在体外不表达胶质纤维酸 具有分化为神经细胞的潜能。 实验二 BMSCs移植治疗PD模型大鼠的研究 鼠脑内的存活和分化情况，探讨BMSCs移植治疗神经退行性疾病的可能机制。【方 大鼠旋转，用免疫组织化学染色检测损毁侧脑组织酪氨酸羟化酶(Tyrosine 毁损侧纹状体内，术后2周起用APO诱导大鼠旋转，用免疫组织化学和免疫荧光 法检测TH的表达和移植细胞的存活、迁移和分化。【结果】30只造模大鼠中经APO 诱导后22只(占73．33％)持续向健侧旋转，平均旋转速度大于7r／min，损毁侧纹 状体和黑质内TH阳性细胞明显减少，成功建立了PD模型大鼠；BMSCs移植脑 内纹状体部位8周后PD模型大鼠平均旋转速度为6．49+0．46r／min，损毁侧纹状体 性细胞，TH阳性细胞较BMSCs移植前增加。【结论】立体定位法单侧纹状体内双 季正剑：骨髓间充质干细胞移植治疗帕金森病的实验研究 和向神经细胞分化，对PD模型大鼠有治疗作用，产生治疗作用的机制可能是外源 性BMSCs经分化为神经元样细胞，部分代替了损毁的多巴胺能神经元的功能。 关键字：大鼠骨髓间充质干细胞；帕金森病模型大鼠；移植；分化