过表达氨基葡萄糖脱氨酶对大肠杆菌氨基葡萄糖合成及中心碳代谢的影响.pdfVIP

第１１卷第４期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ．１１Ｎｏ．４ ２０１３年７月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｕｌ． ２０１３ ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－３６７８．２０１３．０４．００８ 过表达氨基葡萄糖脱氨酶对大肠杆菌氨基葡萄糖 合成及中心碳代谢的影响 王珊珊，高　 璐，严　 明，许　 琳 （南京工业大学 生物与制药工程学院，南京 ２１１８００） 摘　 要：考察过表达氨基葡萄糖脱氨酶对氨基葡萄糖合成及大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）中心碳代谢的影响。 实验结 果表明：过表达氨基葡萄糖脱氨酶使得在３６ｇ／ Ｌ葡萄糖，ｐＨ为９０ 的发酵条件下，发酵２４ ｈ后，重组菌发酵液中氨 基葡萄糖、丙酮酸和乙酸的量分别是对照菌Ｒｏｓｅｔｔａ的２１、１４８和１７４倍；而乳酸的量为２５３ ｇ／ Ｌ，对照菌Ｒｏｓｅｔｔａ 发酵液中的乳酸含量未检测到，重组菌发酵液中柠檬酸及α⁃酮戊二酸的含量分别是Ｒｏｓｅｔｔａ的２９９和２７３倍。 关键词：大肠杆菌；脱氨酶；氨基葡萄糖 中图分类号：Ｑ７８　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２－３６７８（２０１３）０４－００４２－０７ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｏｎ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｃｅｎｔｒａｌ ｃａｒｂｏｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＷＡＮＧ Ｓｈａｎｓｈａｎ，ＧＡＯ Ｌｕ，ＹＡＮ Ｍｉｎｇ，ＸＵ Ｌｉｎ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１１８００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓｏｎｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｃｅｎｔｒａｌｃａｒｂｏｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎＥｃｏｌｉｂｙｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄＴｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｎａｇＢ ｃｏｕｌｄｉｍｐｒｏｖｅｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅｂｙｔｗｏｔｉｍｅｓｏｆｔｈａｔｏｆ Ｒｏｓｅｔｔａ，ｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆ３６ ｇ／ Ｌ ｇｌｕｃｏｓｅ，ｐＨ ９０，ａｆｔｅｒ ２４ ｈ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎＴｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｗａｓ １４８ ｔｉｍｅｓ，ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ １７４ ｔｉｍｅｓ，ｃｉｔｒｉｃａｃｉｄｗａｓ２９９ ｔｉｍｅｓ，α⁃ｋｅｔｏｇｌｕｔａｒｉｃａｃｉｄｗａｓ２７３ｔｉｍｅｓｏｆｔｈａｔｏｆ Ｒｏｓｅｔｔａ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｒｅｌｙ． Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｗａｓ ２５３ ｇ／ Ｌ．Ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎａｌ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗａｓ ｎｏｔ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅｓｅ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ，ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ｔｈｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｉｎ Ｅｃｏｌｉ，ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ａｌｓｏ ｍａｄｅ ｔｈｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｙｒｕｖａｔｅ，ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ