AKT靶向miRNA表达载体的构建及其对胃癌细胞增殖侵袭的影响.pdfVIP

山东医药2011年第 51卷第 35期 AKT靶 向miRNA表达载体的构建及其 对 胃癌细胞增殖侵袭的影响 熊建光 ，李湘楚 ，何小飞 ，于红刚 (1成宁市中心医院，湖北成宁437100；2武汉大学人 民医院) 摘要：目的 构建靶向AKT基因的miRNA真核表达载体，观察其转染胃癌BGC一823细胞后对 胃癌细胞增殖及 侵袭的影响。方法 设计并合成两条针对AKT基因的特异性miRNA干扰序列，与载体 pcDNATM6．2-GW／EmGFP— miR连接，转化大肠杆菌，纯化并鉴定后转染BGC823细胞，实时定量 PCR及 Westernblot技术鉴定重组体对 AKT 基因表达的干扰效果。使用 M1Tr法检测细胞增殖能力，Transwell法检测细胞的侵袭能力。结果 针对 AKT基因 的miRNA干扰质粒构建成功，BGC一823细胞转染该质粒后AKTmRNA及 AKT蛋白表达明显受抑制，细胞增殖和 侵袭能力均显著下降(P均0．05)。结论 AKT靶向nfiRNA真核表达载体构建成功；其可有效抑制 胃癌细胞的 增殖和侵袭能力。 关键词：AKT基因；nficroRNA；RNA干扰；增殖；侵袭 中图分类号：Q782 文献标志码 ：A 文章编号：1002-266X(2011)35-0003-03 ConstructionofmiRNA expressionplasmidtargetingAKT geneanditsinfluenceoncell proliferationand invasionofgastriccancercells XIONGJian—guangl，LIXiang—chu，HEXiao-fei，YUHong—g8ng (1CenterHospitalofXianningCity，Xianning4371002，P．R．China) Abstract：Objective ToconstructthespecificmiRNA expressionvectorstargetingAKTgene，andtoobservethe effectsofvectortransfectingontheproliferationandinvasionofBGC一823cells．M ethods Thespecificpre—miRNA se— quencestargetingAKTgeneweredesignedandsynthesized，thenviaannealingandligatingwithpcDNATM6．2-GW ／EmG— FP—miR inorder．Thecorrectsequencewasconfirmed．TherecombinantvectorweretransfectedintoBGC一823cellswith thehelpofLipfectamine 2000．thenthesuppressioneffecttargetingAKT wasidentifiedbyreal—timePCR andwestern— blottest；MTImethodwasusedtoanalyzecellproliferation；theabilityofinvasionwasdetectedbyTranswellchamberin— vasiveassays．Results TheAKTpre—miRNA recombinedplasmidwassuccessfullyconstucted，anditinhibitedtheAKT mRNA andproteinexpressionsinBGC一823cellseffectively．TheabilityofproliferationandinvasionofBGC一823cellsde— creasedsignificantly(alJP0．05)．Conclusion ThemiRNAexpressionvectorforsilencingAKTcanbeconstructedsue— cessfully；whichcaneffectivelyinhibittheproliferationandinvasionofBGC一823cells． Keywords：AKTgene；miRNA；RNA interference；proliferation；invasion mic