HRM-非标记探针法检测IL-15基因SNPs方法的建立.pdfVIP

重庆医学 2012年 12月第 41卷第 34期 3577 · 论 著 · HRM一非标记探针法检测 IL一15基因SNPs方法的建立 王 明，郑启城 ，姚秀云 ，邓 兵，宪 莹，于 洁△ (重庆医科大学附属儿童医院血液肿瘤科 ／儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室／儿科学重庆市 重点实验室／重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地 400014) 摘 要：目的 建立用于检测 白细胞介素一15(IL一15)基因单核苷酸多态性 (SNP)位点的高分辨率熔解 曲线(HRM)一非标记探 针 的方法 。方法 采用 HRM一非标记探针法及小片段扩增法对 8O名健康儿童 I 15基 因 4个 SNPs位点进行基 因分型 ，采用基 因测序法进行验证并 同时与小片段扩增法分型结果进行 比较 。结果 HRM一非标记探针法与基 因测序分型结果一致 ，准确率为 100 ；未加入温度 内标 的小片段扩增法不能区分野生纯合子和突变纯和子。结论 HRM一非标记探针法是对 已知 SNP位点突 变研究的一种廉价、简便、准确 的基 因分型技术 ，适合于对 已知的 sNP位点或基 因突变进行分型和检测 。 关键词 ：白细胞介素 15；多态性 ，单核苷酸 ；高分辨率熔解 曲线分析 ；非标记探针法 doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2012．34．001 文献标识码 ：A 文章编号：167I-8348(2O12)34-3577—03 Toestablish thehighresolutionmeltinganalysiswithunlabeledprobesforgenotypingIL-15geneSNPs WangYue，ZhengQicheng，YaoXiuyun，DengBing，XianYing，YuJie (DepartmentofHematology—Oncology，theAffiliatedChildrensHospitalofChongqingMedicalUniversity／theKey LaboratoryofChildDevelopmentDiseaseResearchofEducationMinistry／theKeyLaboratoryof PaediatricsoJ’C 。gq g／C 0gq gInternationalScienceandTechnologyCooperationBasefor MajorChildDiseaseDevelopmentandPrevention，Chongqing400014，China) Abstract：Objective WeweregoingtOestablishthehighresolutionmeltinganalysiswithunlabeledprobesforgenotypingIL一 15geneSNP．Methods GenotypesoftheIL一15geneSNPsweredeterminedin80unrelatedHanhealthychildrenusingHighreso— lutionmeltingcurveanalysiswithunlabeledprobes，smallamplificationmethod，genotyperesultswerecorroboratedbygenesequen— cing．Results Thegenotype resultfrom unlabeled probesmethod and genesequencing wereconsistent，theaccuracy ratewas 100 ；smallamplificationmethodwithouttemperatureintercalibrationcouldnotdifferentiatethewildhomozygousandmutantho— mozygous．Conclusion Highresolutionmeltingcurveanalysiswithunlabeledprobesisacheap，convenient，fas