响应面法优化大肠杆菌CD-2产偶氮还原酶培养基的条件.pdfVIP

椰 卷 第 5期 东 北 林 业 大 学 学 报 Vo1．40No．5 2012年5月 JOURNALOFNORTHEAST FORESTRYUNIVERSITY May2012 响应面法优化大肠杆菌CD-2产偶氮还原酶培养基的条件 杜光映辉 崔岱宗 张 宁 赵 敏 李国芳 古晓旭 (东北林业大学，哈尔滨，15oo4o) 摘 要 在摇瓶条件下，对大肠杆茵CD一2发酵生产过程中的主要培养基组成对产偶氮还原酶的影响进行 了 研究。根据响应面法，以单因子试验结果为基础，利用Plackett—Burma设计对影响EcoliCD-2产偶氮还原酶的相 关因子进行 了评估，并筛选 出具有显著效应的3个因子：pH值、MgC1、Na2HPO。用最陡爬坡试验逼近以上3个 因子的最大响应区域后，采用 designexpert7．0统计软件的Box-Behnken设计 以及响应面分析法，确定 coliCD-2 优化后的最佳培养基组成：甘露醇2g·L～、氯化铵3g·L一、接茵量5％、pH值为6．5、KH2PO42g·L～、Na2HPO4 6g·L～、Mgcl0．99g·L～，优化后的酶活达到2．429U ·mL～，是初始酶活的2．85倍。从而增强了EcoliCD一2 所产的偶氮还原酶实际应用于污水处理的能力。 关键词 偶氮还原酶；响应面法；大肠杆茵CD-2 分类号 $715．3 OptimizationofCultureM edium Composition forAzoreductaseProduction byEscherichia eollCD-2Using Re· sponseSurfaceMethodology／DuGuangyinghui，CuiDaizong，ZhangNing，ZhaoMin，LiGuofang，GuXiaoxu(College 0fLifeSciences，NortheastForestryUniversity．Harbin150040，P．R．China)／／JournalofNortheastForestryUniversity． 一 2012，40(5)．一117～121 TheeffectsofculturemediulncompositiononazoreductaseproducedbyEscherichiacoliCD-2werestudiedusingthe shaking．flaskmethod．A Plaekett．BurmandesignWas usedtoinvestigatetheeffectsofdifferentfactorsonazoreductasepro— ductionbasedontheresu1tSofsingle．factorexperiment．Threestatisticallysignificantfactors，pH value，MgCl2concentm— tion，na dNa，HPOdconcentration，wereobtmned，andthenthesteepestascentprocedureWas employedtodefinetheopti． malresponseregionforthesethreefactors．Finally，Box．Behnkenandresponsesurfacemethodologywereappliedtodeter- minethecompositionoftheculturemde ium optimizde fortlleproductionofazoreduetasebyEscherichiacoliCD-2．TheoD． timalmediam compositionofrazoreduetaseproductionwasobtainedas mannitolconcentration2g-L～，NHdC1concentra- tion3g ·L～，inoculationamount5％ ，pH 6．5，KH2PO4concentration2g ·L～，Na2HPO4concentrat