耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因的LAMP检测方法研究.pdfVIP

2011年 8月 食品研究与开发 第 32卷第 8期 FoodResearchAndDevelopment 检测分析 == 68 耐甲氧西林葡萄球 ecA基因的LAMP 检测方法研究 李霞 ，张宏伟 ，郑文杰：。黄金海-， (1．天津大学 化工学院，天津300072；2．天津市出入境检验检疫局 ，天津 300457) 摘 要：瓤cA是耐甲氧西林葡萄球菌携带的耐药基 因。本实验根据克隆的 cA基因序列，在保守区设计了一套环介 导等温扩增(LAMP)引物，通过条件优化，建立了耐甲氧青霉素mecA基因LAMP辛奎测方法，其最佳工作条件为：甜菜碱 浓度为0．8moYL，M 浓度为20mmol／L，反应温度63℃，时间50min。此方法可在60min左右完成对mecA基因的检测， 特异性好，mecA基因的LAMP检测灵敏度~：hPCR高100倍。对38株葡萄球菌分离株的mecA基因的检测表明，阳性携带 率为44．7％。 关键词：葡萄球菌；环介导等温扩增；mecA基因 ApplicationofLoop-mediatedIsothermalAmplificationforDetectionofmecA inMRSA LIXia．ZHANGHong—wei．ZHENGWen-jie2,HUANGJin—hai， (1．SchoolofchemicalEngineering＆Technology，TianjinUniversity，Tianjin300072，China；2．TianjinEntry—Exit InspectionandQuarantineBureau，Tianjin300457，China) Abstract：mecAisuniqueasaresistancegeneofmethicillin-resistantStaphylococccusaureus(MRSA)．Based ontheclonedmecA geneintheassay，asetofprimerswasdesigned againsthighlyconserved sequences respectively，thentheLAMPreactionconditionswereoptimisedandthedetectionforthemecAgeneusingloop- mediatedisothermalamplicationwereestablishedinitially．Thefinalconditionswerefixed，betaine0．8mol／L， M 20mmol／L，completedwithin50minin63℃ isothermalwater-bath．ComparedtoPCR detection，this detectioncanbecompletedin60minwithgoodspecificityandmorerapidity，100timeshighersensitivityofrthe mecAgene．ThepositiverateofthemecA geneis44．7％in38staphylococcusaureusisolated． Keywords：staphlococcus；loop—mediatedisothermalamplication；mecAgene 1961年Jevons在英国首次发现耐甲氧西林金黄色 繁琐且敏感性不高；蛋白检测法是采用抗PBP2a蛋白 葡萄球菌 (methicillin—resistantStaphylococccusaureus， 的单克隆抗体包被乳胶颗粒，与MRS的膜蛋白提取物 MRSA)，80年代后期MRSA已成为全球性的病原微生 作用后，通过凝集反应可产生肉眼可见的凝集颗粒，检 物，占大型医院分离金黄色葡萄球菌的60％～80％ 。 测菌体中的PBP2a来确证MRS，此法快速有效，但 由于 mecA基因是MRSA特有