甘蓝型油菜反义Fad2基因RNAi载体无选择标记转化研究.pdfVIP

2008年 21卷6期 西 南 农 业 学 报 V0L21 No．6 SouthwestChinaJournalofA culturalSciences 文章编号：1001—4829(2008)06—1527—04 甘蓝型油菜反义 Fad2基因 RNAi 载体无选择标记转化研究 李兰玉 ，陈 苇 ，杨清辉 ，罗延青 ，符明联 ，董云松 ，李根泽2，王敬乔 (1．云南农业大学农学与生物技术学院，云南 昆明 650201；2．云南省农业科学院经济作物研究所 云南省农业生物技术重点实验 室，云南 昆明 650223) 摘 要：利用甘蓝型油菜种子特异性贮存蛋白基因cruciferin启动子及 NOS终止子构建 了无选择标记基 因且含有反义结构的油酸 脱饱和酶基因( )的RNAi表达载体。通过农杆菌介导法，获得了无选择标记转基因植株；再生植株 的PCR检测表明，外源基 因已高频率地整合到油菜基因组中，而且获得的转基因种子通过脂肪酸含量分析表明，油酸含量比对照有了很大的提高。 关键词：甘蓝型油菜；Fad2基因；无选择标记 ；RNA干扰 ；基因转化 中图分类号：$634．3 文献标识码 ：A Research onmarker-freetransformationofBrassicanapuswith Fad2antisensegeneandRNA interference LILan．yu。 CHENWei，YANGQing．hui，LUOYan—qing，FUMing．1ian，DONGYun．song2，LIGen．ge，WANGJing—qiao 。 (1．FacultyofAgronomyandBiotechnology，YunnanAgrculturalUniversity，YunnanKunming650201，China；2．KeyLaboratoryofYunnan AgriculturalBiotechnology，EconomicCropResearchInstitute，YunnanAcademyofA culturalSciences，YunnanKunming650223，China) Abstract：A RNA interferenceexpressioncassettefor d2gene，whichismarker-freegeneandwithantisensestructure，wasconstructedU— singthepromotorofcrucfieringenefromBrassicanapusandNOSterminator．Transgenicrapeplantswithoutselectionmarkergeneswereob- tainedbyAgrobacterium—mediatedtransformation．TheresultsofPCR analysisindicatedthat genehadbeenintergatedintothegenome ofrapesede inhighefficiency．Thefattyacidcontentanalysisshowedthattheoleicacidcontentof~ansgenieseedwasgreatlyincreasde as compraedwithcontro1． Keywords：Brassicanapus；Fad2gene；marker—free ；RNAi；genetrna sformation 油菜是世界上重要的油料作物之一，菜籽油中 成为油菜品质改良的重要 目标之一。 脂肪酸含量影响油的营养价值和经济价值。因此， 油酸脱饱和酶基因 (Fad2)控制产生的油酸脱 菜籽油脂肪酸品质改良是油菜品质改良的重要 目 氢酶是植物产生多聚不饱和脂肪酸的关键酶，石东 标 ¨]。在功能上饱和脂肪酸低于 3％、油酸含量接 乔等 用农杆菌介导法，使油酸含