植原体免疫主导膜蛋白Imp基因在大肠杆菌中表达条件优化.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2012，40(7)：3873—3876 责任编辑 朱琼琼 责任校对 李岩 植原体免疫主导膜蛋 白Imp基因在大肠杆菌中表达条件优化 柴化建 ，赵海泉 ，张丽君 ，罗焕亮。 (1．深圳市职业技术学院，广东深圳 518055；2．安徽农业大学生命科学学院，安徽合肥 230036；3．深圳w,A境检验检疫局，广东深圳 518045) 摘要 [目的]为提高植原体膜蛋白Imp基因在EcoliBI21(DE3)中的表达量 ，优化Imp基 因的原核表达条件。[方法]通过设计正交 试验，考察不同的培养条件对工程茵E．coliBL21(DE3)一pET-28a(+)一Imp的影响。在获得最佳培养条件的基础上考察不同诱导条件对 Imp蛋 白表达量的影响。利用SDS．PAGE和GeneTools凝胶分析软件分析融合蛋白Imp的表达量。[结果]表达条件优化结果表明，最 佳培养条件为：温度37℃，pH7．0，装液量20％，振荡速度200r／min；最佳诱导条件为：温度37℃，起始OD 1．5，IPTG终浓度0．1 mmol／L，诱导培养时间6h。[结论]在最佳条件下Imp表达量达7O．98m#L，确定了Imp融合蛋白在大肠杆菌的优化表达条件。 关键词 植原体 ；Imp基因；表达条件 ；正交试验设计 中图分类号 Q937 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2012)07—03873—04 OptimizationofExpressionConditionsforlmmunodominantMembraneProteinGeneofPhytoplasmasinE．coli CHAIHua-jina etal (ShenzhenP0lytechnic，Shenzhen。Guangdong518055) Abstract 10biective]Thisstudyaimedtoincreasetheexpression1evelofimmunodominantmembraneproteingene(Imp)ofphytoplasmas inE．colB也1(DE3)． M『ethod1Onthebasisoforthogonalexperiment．effectsofdifferentcultureconditionsonrecombinantbacteriaE． coliBI21一pET一28a (+)一Impwereexplored．Basedontheobtainedoptimalculturecondition．effectsofdifferentinductionconditionsonthe expressionlevelofImpproteinwereexplored．Theexpression levelofImpfusionproteinwasanalyzedbyusingSDS—PAGE andGeneTools software． R『esult]Theresultsshowedthattheoptimalconditionsforculturewereat37℃。pH7．0，withliquidvolumeof20％ andoscilla． tionspeedof200r／min：theoptimalconditionsofrinductionwereat37℃ for6h，withinitial 0D ofabout1．5andI Gfinalconcentration of0．1reotol／L． 『ConclusionjTheexpressionlevelofImphadachieved70．98mg／Lundertheoptimalconditions．Optimizedconditionsfor expressionofImpfusionproteininE．coliweredetermined． Keywords Phytoplasma；Impgene；Expressioncondition；Orthogonalexperimentaldesign 植物植原体 (phytoplasma)是一类无细胞壁，类似植物病 所在实验室前期 已成功构建 了工程菌 E．coliBL21(DE3)一 原细菌的原核生物。存在于植物韧皮部筛管细胞中，对植物 pET-28a(+)一Imp，并进行了初步的表达。 危害性大…。目前 已经发现此类微生