蝎毒多肽抑制白血病干细胞龛内活化的实验研究.pdfVIP

2011年8月第28卷第4期 天 津 中 医 药 Aug．2011，Vo1．28No．4 TianjinJournalofTraditionalChineseMedicine 329 蝎毒多肽抑制 白血病干细胞 龛 内 活 化 的 实 验 研 究术 杨向东，杨文华，史哲新，刘宝山，高 宏，张 蕾，陈艳鑫 (天津中医药大学第一附属 医院血液科，天津 300193) 摘要：旧 的】观察蝎毒多肽(PESV)抑制白血病干细胞 (LSC)在骨髓龛内的活化效应 。方【法】分离白血病 ／急性淋 巴细胞 白血病 (AML／ALL)患者LSC，置于Transwell小室中，分为高中低剂量组及对照组，分别加入不同浓度蝎毒多 肽后培养，计算不同浓度组及不同时间段的LSC迁移率。结【果】PESV组迁移率分别为(25．01~6．83)％、(36．85~3．83)％、 (50．73~7．15)％，与对照组 (49．10~6．12)％比较差异具有显著性 (P0．05)，高剂量组迁移率高于中低剂量组。[结 论1不同浓度 PESV均有抑制 白血病干细胞活化作用，抑制强度呈浓度依赖。 关键词：蝎毒多肽 ；白血病干细胞；龛 ；活化效应 中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：1672—1519f2011)04—0329一O3 随着 白血病治疗方法不断进步 ，治愈 白血病面 之间者符合本实验要求 。收集 PESV蛋白峰，临用时 临最大问题不是如何获得骨髓形态学缓解 ，而是如 PESV用生理盐水溶解稀释成各浓度 。 何 徐患者体内白血病干细胞(LSC)。笔者研究的蝎毒 1．3 主要试剂及仪器 RPIM一1640 (Gibco公司)， 多肽 (PESV)是从东亚钳蝎蝎毒中分离和纯化的提 青霉素、链霉素(Hyclone公司)，环磷酰胺 (CTX，江 取物 ，是一种细胞毒成分，具有较强的协同化疗药 苏恒瑞医药股份有限公司)，类标准胎牛血清 (兰 物杀伤白血病干细胞作用。近年研究表明其协同作 州 民海生物公司 )，Transwell板 (Corning公司)， 用机制之一是抗 白血病干细胞多药耐药 。 Matrigel凝胶 (BD公司)，抗肿瘤坏死 因子 (TNF一 )， 1 材料 (Peprotech公司)，胰蛋 白酶(Hyclone公司)，锥虫蓝 1．1 标本及 白血病干细胞株 2010年 1—12月，本 (Amresco公司)。 院收治的初发及复发急性白血病 (AL)患者 35例 ， 2 方法 男 19例 ，女 16例，平均年龄 39．6(14～80)岁。急性 2．1 绘制生长曲线 锥虫蓝染色，选取活细胞数95％ 非淋巴细胞 白血病 (ANLL)23例 (其中慢性粒细胞 的病例。调整待用细胞悬液细胞数至5×l0s个／mL， 白血病急粒变6例，ANLL 53例，ANLL—M210例， 接种于 24孑L板，每天用锥虫蓝染色计活细胞数，连 ANLL—M 4例)，急性淋巴细胞 白血病(ALL)12例。 续 7d，绘制生长曲线。 初发21例，复发 l4例 (复发患者至少半个月以上 2．2 锥虫蓝实验 选取对数生长期的细胞悬液，调 未用化疗)。无菌操作 留取骨髓标本各 3mL，肝素抗 整浓度至 5xlOA／mL，180x／L接种于 96孔板 ，分为 凝，经磁珠分离法分离 白血病干细胞 ，用 RPMI一1640 药物组和对照组分别加入 PESV1、10、100、1000 咖 L 培养液重新悬浮细胞，调整浓度至 2x10~／mL备用。 和生理盐水各2O L，每个药物浓度设6个复孔，孵 1．2 PESV的制备及鉴定 利用分子筛层析技术对 箱孵育 24h后锥虫蓝活细胞拒染法测活细胞数。细 蝎毒冻干粉分离提取，收集蝎毒Ⅲ一Ⅳ蛋白峰。应用 胞生长抑制率=(空 白孔平均值一加药组平均值)／空 高效液相色谱 (HPLC)仪，LC／MS联用技术鉴定结 白孔平均值x100％