快速微波免疫组化染色技术在临床病理中的应用.pdfVIP

第 29 卷 第 1 期 吉 林 医 药 学 院 学 报 Vol . 29 No. l 一 12 一 2008 年02 月 Journal of Jilin Medical Coll ege Feb.2008 文章编号: 1673-2995 2008) 0 1-00 12-02 ·技术方法 · 快速微波免疫组化染色技术在 临床病理 中的应用 顾 霞，魏 明洁 北京大学附属 口腔医院病理科 ，北京 10008 1) 摘 要: 将微波技术应用于免疫组化染色中，建立快速有效的免疫组化染色方法。改进后的方法较传统染色 特异性着色增强，非特异性背景降低 ，并且脱片率降低，将临床病理传统的免疫组化染色时间由原来的2 d 缩 短到90 min . 关 键 词: 微波;免疫组化; 临床病理 中图分类号: G782 . 1 文献标识码 : B 免疫组化染色技术 已经成为临床病理学诊断及 冲洗，3 min x 3 ; 三抗 ，室温，30 min ; PBS 冲洗， 鉴别诊断的重要方法学，而且还广泛应用于对肿瘤病 3 min x 3 ;DAB 3 ,3 一二氨基联苯胺) 显色，镜下观察 人的用药以及防化疗指导上。但常规免疫组化染色 显色情况，一般控制在 ro min 之 内; 自来水冲洗终止 程序十分费时，而且脱片率较高、背景染色过深 ，这都 显色;苏木素复染 ; 19. 70% ,80% ,90% , 100% 酒精脱 大大影响临床病理诊断的准确率。如果利用微波产 水上行;二甲苯，10 min x 3 ;加拿大树胶封片。 生的超高速震荡及穿透效应可加速抗原抗体结合反 免疫组化常规染色方法最大的缺点就是耗时长 应的原理，将微波用于免疫组化全过程 的诸多步骤 ， 且脱片率高，由于时间过长还易造成非特异的着色， 可 以提高染色质量 ，缩短染色时间。现将实验的基本 不利于临床对疑难病理做 出快速准确的诊断。 过程叙述如下 。 1. 3 改 良方法 经过摸索改 良后的免疫组化方法如下: 1 材料与方法 标本切片用首都医科大学生产的防脱片胶片捞 片;石蜡切片用微波火力 80 档烤片 8 min ;二 甲苯脱 1. 1 材 料 腊 ，10 min x 3 洛 浓度酒精下行至脱水;;3% 双氧水微 2450 MHz 医用微波炉，格兰士;组织来源于常规 波火力20 档5 min ;PBS 冲洗 ，微波火力20 档30 。x 病理活检标本;主要抗体均为北京中衫试剂有限公司 2 ;用 EDTA 抗原修复液，微波火力 100 档 10 min ，注 提供的临床 即用型抗体 : CK 鼠抗角蛋 白单克隆抗 意切片置于盛有抗原修复液的微波盒架内，再将微波 体) 标记上皮细胞及肌上皮细胞，鼠抗 S- 100 单克隆 置于盛有水的饭盒 内;正常山羊血清封闭，微波火力 抗体标记周围神经、朗格罕氏细胞、色素细胞、单核细 40 档5 min ; 弃去血清，滴加一抗，微波火力40 档 胞、淋巴结构的小树突细胞;苏木素辅助染液。 5 min x 2 ，注意片盒保持湿润以防干片，可与片盒底 1.2 常规方法 部加少许水;PBS 冲洗，微波火力20 档30 s x 2 ;滴加 石蜡包埋切片后烤箱58 ℃烤过夜;用 APES 1s 二抗孵育，微波火力40 档 5 min ;PBS 冲洗，微波火力 50 丙酮稀释) 及丙酮处理防脱载玻片