赤点石斑鱼神经坏死病毒MCP基因原核表达条件优化.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiAgri．Sci．2009，37(6)：2422—2424，2429 责任编辑 张蕾 责任校对 吴晓燕 赤点石斑鱼神经坏死病毒MCP基因原核表达条件优化 苏友禄 ，冯娟 ，孙秀秀，郭志勋 ，闰云锋 ，黄剑南 (1．中国水产科学研究院南海水产研究所，广东广州5103oo； 2．华南农业大学兽医学院，广东广州 510642；3．上海海洋大学生命科学与技术学院，上海 200090) 摘要 [目的]优化赤点石宽鱼神经坏死病毒的主衣壳蛋白(MCP)基因的原核表达条件。[方法]采用RT—PCR技术扩增出赤点石斑 鱼神经坏死病毒 cP基因，构建重组表达载体pRSETA—MCP，以其转化大肠杆菌BI21(DE3)plysS，在不同培养基、温度、pH值条件下进 行诱导表达。[结果]重组菌在 SOB和LB培养基、pH值7．0、37℃条件下表达量最高，所得的融合蛋白分子量约为44．5kD。[结论] 该研究为 RGNNV-MCP疫苗研制奠定了基础。 关键词 赤点石斑鱼；神经坏死病毒；主衣壳蛋白；表达条件 中图分类号 s917 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2009)02—02422—03 OptimizationforProkaryoticExpre~ionofMcP GeneofRed．spottedGrouperNervousNecrosisVirus SUYou-luetal (SouthChinaSeaFisheriesResearchInstitute，CAFS，Guangzhou，Guangdong510300) Abstract lObjectivelTooptimizetheprokaryoticexpressionofMCPgeneofRed—spottedGrouperNervousNecrosisVirus．1Method】The MCP genewasamplifiedfrom Red．spottedGrouperNervousNecrosisviralgenomebyRT—PCR．Therecombinantexpression vectorpRSET A—MCPwasconstructedandtransformedintoBL21(DE3)plysStoexpressproteinswithinductionindifferentmedia，atdifierentpH，oratdif- ferenttemperatures． 『Result]Theexpressionlevelofrecombinantbacteriareachedapeakwithinductionundert}lefollowingcondition：SOB orLBmedium，pH7．0，37℃while血efusionproteinwasabout44．5kDinmolecularweight．IConclusionlThisstudyprovidedabasisfor thedevelopmentofRGNNV．MCPvaccine． Keywords Epinephelusakaara；NNV；MCP；Expressionconditions 鱼类神经坏死病毒(uervousnecrosisvirus，NNV)，属于诺 工程 (大连)有限公司，质粒提取试剂盒 (TIANprepMiniPlas- 达病毒科，p诺达病毒属，由于p诺达病毒只感染鱼类，NNV midKit)购自天根生化科技(北京)有限公司；琼脂糖凝胶回 又称鱼类诺达病毒，是 目前发现的个体最小的鱼类病毒 。 收试剂盒(GelExtractionKit)购自杭州维特洁生化技术有限 调查发现该病毒是多种海水鱼类暴发性传染病的致病原，主 公司；PCR产物纯化试剂盒购 自QIAGEN公司。DNAMark- 要侵害宿主的脑部和视网膜等神经组织 。发病期主要在 er、低分子量标准蛋白、氨苄青霉素(Amp)、诱导剂(IPTG)等 海水鱼类种苗生产阶段，鱼苗死亡率高达90％以上，其对部 试剂购 自广州威佳科技有限公司。 分种类的成鱼也有较高的致死率，还能危害网箱养殖的鱼 1．4 RGNI MCP基因的RT-PCR扩增 类 。。1999年 ，在我 国广东省 赤点石斑 鱼 (Epinephelus 1．4．1 引物合成与设计。根据