特异PCR方法对枯草芽孢秆菌群的鉴定区分.pdfVIP

匿垫型垫查 《鱼墼王些》：至Q!Q垂曼墨!笪笪兰墼 特异PCR方法对枯草芽孢秆菌群的鉴定区分 刘勇李辉李金霞程池 摘 要根据枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆茵和解淀粉芽孢杆菌基因组中3-甘露聚糖酶基因上下 游序列设计3对种特异引物。以中国工业微生物茵种保藏管理中心(CICC)保藏的33株枯草芽孢杆茵、 地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆茵作为参考茵株，利用特异PCR方法对3种枯草芽孢杆茵群细茵进行鉴 定区分。结果表明该特异PCR方法能够有效区分枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆茵。 关键词特异PCR；枯草芽孢杆菌群；鉴定区分 中图分类号$852．61+6 subtilis 枯草芽孢杆菌群(Bacillus group)是枯草甘露聚糖类多糖主链的1，4-13一甘露糖苷键。枯草芽 芽孢杆菌及其近缘种的总称，其包括枯草芽孢杆菌 孢杆菌群中的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和解淀粉 (B．subtilis)、地衣芽孢杆菌(B．1icheniformis)、解淀粉芽孢杆菌都能够产生B一甘露聚酶。本文根据枯草芽 孢杆菌、地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌基因组中 芽孢杆菌(B．amyloliquefaciens)和萎缩芽孢杆菌(B． atrophaeus)等。枯草芽孢杆菌群细菌能够产生多种代 谢产物，在食品、医药、饲料和农业等领域中具有重 了3对种特异引物，并以中国工业微生物菌种保藏管 要应用价值，因此对其准确鉴定具有重要理论和实 理中心(ChinaCenterofIndustrialCultureCollection， 践意义。 CICC)保藏的33株枯草芽孢杆菌群细菌作为参考菌 PCR)是当今快速准确鉴株，试图通过特异PCR方法对枯草芽孢杆菌、地衣芽 特异PCR技术(specific 定菌种的方法之一，可避免培养方法和生化鉴定方法 孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌进行鉴定区分。 的烦琐，在临床诊断、食品检测和土壤微生物鉴定等 l材料与方法 领域广为应用。特异PCR技术不仅可以实现微生物 1．1供试菌株 种的区分，也可实现亚种间的区分，如Torriani(1999)供试菌株33株均为中国工业微生物菌种保藏管 等设计脯氨酸亚氨基肽酶基因特异引物，通过PCR理中心(CICC)保藏菌种。其中枯草芽孢杆菌(B． delbrueckii 产物大小成功对Lactobacillus subsp．bul— gaficus和L．delbrueckiisubsp．1actis两个亚种进行了 区分。Oleg等(2004)和权春善等(2006)利用枯草芽孢 杆菌和解淀粉芽孢杆菌yyaR、yyaO和tetB—tetL基因 顺序的差异设计特异引物，通过特异PCR对二者进 行区分。Idriss等(2002)则根据枯草芽孢杆菌和解淀 粉芽孢杆菌仅一淀粉酶基因差异，通过特异PCR完成 了一些枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌的区分。 1．2主要试剂 3．2．I．78)是一 DNA聚合酶、dNTP购白天为时代生物有限 B一甘露聚糖酶(B—mannanase，EC Taq 种半纤维素水解酶，能够水解半纤维素主要组成成分 司；其它化学药品均为进口分析纯产品。 1．3培养基 王德圣，中国食品发酵工业研究院，中国工业微生物菌种 营养肉汁培养基：蛋白胨5g／l、牛肉膏3g／l、氯化 保藏管理中心，100027，北京市朝阳区霄云路32号。 钠5g／l，pH值7．0。固体培养基则添加琼脂15g／l。 李辉、李金霞、程池(通讯作者)，单位及通讯地址同第一 1．4特异PCR引物的设计