恶性疟原虫FCC1／HN株己糖激酶基因的扩增、克隆和序列分析.pdfVIP

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2017-09-11 发布于贵州
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恶性疟原虫FCC1／HN株己糖激酶基因的扩增、克隆和序列分析.pdf

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维普资讯中国寄生虫病防治杂志 2004年8月第 17卷第 4期 Chin J ParasitDisCon August2004．Vo1．17，No．4 论著 · AMPLIFICATION，CLONINGANDSEQUENCEANALYSIS OFTHEHEXOKINASEGENEOFPLASMr0DJUM FAlLCJPAR ISOLATEFCC1／HN wu Zhong—luan。YU Xin—bing一，WU Zhong—dao，XU Jin，CHEN Shou—yi，I．IBao—hua (DepartmentofParasitology．SchoolofPre—clinicalMedicine，SUN Yat—senUniversity，Guangzhou510080，China) [Abstract] Objective Toamplifythehexokinase(HK)geneofPlasmodiumfalciparum isolateFCC1／HN，compare thesequencewiththatofotherP．falciparum isolatesandhuman，andconstructitsprokaryoticandeukaryoticexpres— sionplasmids． Methods TheHK genewasamplifiedbyPCRfrom thegenomicDNAofP．falciparum isolateFCC1／ HN．TheamplifiedHK genewasclonedintotheprokaryoticandeukaryoticexpressionvectors，pET一30a(+ )andpcD— NA ，andtransferredintoEscherichiacoliBL21／DE3andJM109，respectively．ThepositiverecombinantpET一30a(+)一 HK andpcDNA 一HK werescreenedand identifiedbyendonucleasedigestionand PCR．ThenucleotidesequenceofHK genewasdeterminedbythedideoxychainterm inationm ethod．TheDNA sequenceanditsdeducedprotein sequencewere analyzed． Results TheHK geneofP．falciparum isolateFCC1／HN wasspecificallyamplified．andthecorrectrecom— binantplasmidspET一30a(+ )一HK and pcDNA 一HK wereconstructed．The resultsofsequencing thenucleotideacids showedthatthefulllengthHKgeneofP．falciparum isolateFCC1／HN was1482basepair．Itencodedaproteinof493 aminoacids．Theam inoacidssequencewasthesameasthatofisolate3D7，with99．8 identitYoftheisolateK1，but with23．2 一26．6 identityofallthe4typesofthehumanHK． Conclusion TheHKgeneofP fah’iparunIisolate FCC1／HN wasamplified．Itsrecombinantprokaryo