柑橘钙结合蛋白基因的克隆及其在果皮褐变中的表达分析.pdfVIP

生物技 术通报 - 研 究报 告 · BIoTECHNoLoGY BULLETlN 2011年第 6强 柑橘钙结合蛋 白基因的克隆及其在 果皮褐变 中的表达分析 高雪 (韩 山师范学院生物系，潮州 521041) 摘 要： 从柑橘果皮褐变相关基因的差减 cDNA文库中，筛选了一个与钙结合蛋 白基因家族同源的EST片段，通过 RACE技术克隆了其全长 cDNA序列(CsCAB，GenBank登录号EF010854)。CsCAB基因全长984bp，含有一个 621bp的开放 阅读框，编码 207个氨基酸，预测蛋 白质分子量为22．95kD，理论等 电点为4．5；序列分析结果显示 CsCAB与钙结合蛋 白具有 很高的同源性，且具有钙结合蛋 白的保守结构域EF—hand。Northernblot结果显示 CsCAB在褐变果皮中上调表达，说明该基因 与柑橘果实的果皮褐变有密切关系。 关键词： 柑橘 钙结合蛋白 克隆 表达 果皮褐变 M olecularCloningofa Calcium-bindingProtein Genein Citrus Fruitand ItsExpressionAnalysisin PeelPitting GaoXue (Bwlo~ Department，HanshanNormalUniversity，Chaozhou521041) Abstract： BasedonthecDNA subtractionlibrarywhichhadbeenconstructedtoidentifydifferentiallyexpressedgenesinpeelpit— ringofcitursfurit，thefull—lengthcDNA sequenceofCsCABhomologoustocalcium—bindingproteingenefamilywasisolatedfrom citrus fruitbyrapidamplificationofcDNAends(RACE)．CsCABgehe(GenBankaccessionno．EF010854)isof984nucleotidesencodinga proteinof207aminoacids．Thecalculatedmolecularweightofthematureproteinwas22．95kDandtheoreticalisoelectricpointWas 4． 5．SequenceanalysisshowedthattheCsCABproteinhadstrikinglyconservedEF—handregionwhichisconsideredasthecharacteristic ofcalcium—bindingprotein(CAB)family．NorthernblotanalysisshowedthatCsEXPmRNA levelofpittedpeelwashigherthanin healthypeel，which indicatedthatCsCABgenewasinvolvedinpeelpittingofcitursfruit． Keywords： Citurs Calcium—bindingprotein Cloning Expression Peelpitting 细胞存在介导钙信号 的钙结合蛋 白首先 由 理化学刺激等，经其受体进行一系列跨膜信号转 Ebashi等于 1965年提 出，随后 Cheung等发现 了 换后 ，都可以调节钙的分布及在特定部位的瞬间 一 类能结合钙离子的磷酸二酯酶激活蛋 白，进一 变化而产生钙信号 ，从而调控相关基 因的表达和 步研究发现这类蛋 白还有激活牛脑腺苷环化酶、 生理反应 。细胞衰老或疾病过程 中，在细胞出现 钙依赖性ATP酶和蛋 白激酶等多种功能，并且普 病理、生理损害之前