BIRC5 shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定.pdfVIP

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2017-09-11 发布于安徽
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BIRC5 shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定.pdf

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ISSNIO07—8738细胞与分子免疫学杂志 (ChinJCellMolImmuno1)2011，27(7 767 · 论著 · 文章编号：1007—8738(2011)07—0767—03 BIRC5shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定饶国洲，李昂，朱永进，石建峰，苟建重，张引成 (西安交通大学口腔医院：中心实验室，牙周科，颌面外科，陕西西安 710004) Constructionand identificationofBⅡ 双酶切线性化的pMAGic慢病毒质粒载体中，经转化 DH5ct 感受态细胞并筛选出阳性克隆，采用PCR扩增和 DNA测序 shRNA lentiviralexpressionvector 鉴定阳性克隆。结果：PCR扩增产物经凝胶电泳阳性克隆得到335bp条带，阴性克隆得到298bp条带，DNA测序结果证 RAOGuo-zhou，LIAng ，ZHU y0 -ji,~，SHIJian一实其含设计合成序列。结论：4对 BIRC5shRNA重组慢病毒 ng ，GOUJian-zhong ，ZHANGYin—cheng 表达载体构建成功，为研究靶向BIRC5siRNA对肿瘤细胞增 ResearchCenterofStomatology， DepartmentofPeriodontology，殖抑制与诱导凋亡作用及基因治疗研究奠定了实验基础。 DepartmentofOralMaxillofacialSurgery，StomatologicalHospital， [关键词]RNA干扰；BIRC5；慢病毒表达载体 MedicineCollegeofXi’8nJiaotongUniversity，Xi’an710004， [中图分类号]Q78 [文献标识码]A China [Abstract] AIM：Designandsynthesiscomplementary 凋亡又称程序性细胞死亡，是由基因控制的细 DNA sequencesof3pairsofshOrthairpin structure anda 胞自主性的死亡过程，凋亡相关基因对细胞增殖、生 pairofnegativecontrolsequencebyRNA interferencetech- 长起着重要调控作用，抗凋亡基因的过度表达可导 niqueandconstructandidentifyalentiviralinterferencevec- 致肿瘤的发生。BIRC5可抑制多种凋亡刺激因子引 torwithhumanBIRC5geneastargetgene．METHODS：起的凋亡，是迄今发现最强的凋亡抑制基因…。 ThedesignedandsynthesisedSingle-Strandedprimerwere BIRC5的表达水平与肿瘤的发生、发展、化疗耐药及 annealed to Double--Stranded oligo sequences and sub·· 预后密切相关。由于其在多数肿瘤中明显表达，而 cloned into linearpMAGiclentiviralplasmidvectordigested