DOF转录因子AtDof1．7RNA干扰载体的构建及拟南芥的遗传转化.pdfVIP

作物学报 ACTAAGRONOMICA SINICA 2011，37(7)：1196—1204 http：／／www．chinacrops．org／zwxb／ ISSN0496—3490；CODENTSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．cn DoI：10．3724／SP．J．1006．2011．01196 DoF转录因子atDof1．7RNA干扰载体的构建及拟南芥的遗传转化 尹明智 官 梅 肖 钢 李 枸 官春云 湖南农业大学油料作物研究所 ，国家油料作物改良中心湖南分中心，湖南长沙 410128 摘 要：DOF(DNAbindingwithonefinger)转录因子是植物特有的转录因子家族，含有一个独特的富含Cys残基的单 锌指 DNA结合区域，在植物生长发育中参与多种生物学过程。本研究根据拟南芥 AtDof1．7基因(GenBank登录号为 AT1G51700)序列设计含有不同酶切位点的特异性扩增引物，以拟南芥总 DNA为模板，扩增 AtDof1．7基因片段，将 AtDof1．7基因正向反向分别插入表达载体的相应位置，构建成AtDof1．7基因的RNA干扰载体pADOFI。利用改良的 floral—dip方法将干扰载体pADOF1成功转入野生型拟南芥，经草甘膦抗性筛选和PCR检测获得5株阳性转基因植株。 利用 RTPCR技术和气相色谱法分别分析了AtDof1．7基因的表达和种子脂肪酸组成，结果表明，5株转基因植株中 AtDof1．7基因的表达量不同程度低于野生型植株，种子油酸含量明显上升，亚麻酸含量 明显下降，说 明AtDof1．7转录 因子与拟南芥种子脂肪酸代谢途径有一定的关系，为进一步研究其在脂肪酸代谢过程中的调控作用以及在油菜中研 究该类转录因子的功能奠定了基础。 关键词：DOF转录因子；AtDof1．7；拟南芥；RNA干扰载体；脂肪酸代谢途径 RNAiVectorConstructionofAtDof1．7TranscriptionFactorsandGenetic TransformationintoArabidopsisthaliana YINM ing．Zhi，GUANM ei，XIAOGang，LIXfin，andGUANChun—Yun OilseedCropsInstitute／NationalOilCropsImprovementCenter，HunanAgriculturalUniversity，Changsha410128，China Abstract：TheDOF (DNAbindingwithonefinger)transcriptionfactorsaremembersofafamilyofplnat—specifictranscription factorsthathaveahighlyconservedDNA—bindingdomain．namelyDofdomainwhichcontainsasingleC2C2一typezinc—finger— likemotifnadspecificallyrecognizesna (Aft)AAAGsequenceastherecognitioncore．ItsuggestshtattheDofrtanscriptionfac— torsplaydiverserolesinspecificbiologicalprocessesinplna ts．Membersofthisproteinfamilyinplnatsareofundtobeinvolved inhtegeneregulationofmnayprocesses，buttherolesinfattyacidmetabolism arerraelyreported．ToinvestigatewhetherAt— Dol1．7Doftrnascriptionfactorcanregulatefattyacidmetabolism，onhtebasisofhtesequenceofAtDqH．7(GenBankaccession No．AT1G51700)．wedesignedthespecificprimercontainingdifferentenzymesites．WihthtetemplateofArabidopsisthaliana DNA，hteAtDof1．7ge