HA基因138位点突变提高H5亚型禽流感疫苗候选株在鸡胚中的繁殖能力.pdfVIP

一 38一 江苏农业科学 2011年第39卷第3期 张文俊，薛 涛，钟 蕾，等．HA基因138位点突变提高H5亚型禽流感疫苗候选株在鸡胚中的繁殖能力[J]．江苏农业科学，2011，39(3)：38—41 HA基因 138位点突变提高H5亚型禽流感疫苗 候选株在鸡胚中的繁殖能力 张文俊，薛 涛，钟 蕾，宋庆庆，吴小伟，张 妍，刘秀梵 (扬州大学／农业部畜禽传染病学重点开放实验室，江苏扬州225009) 摘要：目前 ，H5亚型禽流感疫苗的大规模生产仍使用鸡胚培养的重组病毒灭活疫苗。为加深对重组病毒在鸡胚 中繁殖适应性分子机制的理解 ，并获得在鸡胚中的高产疫苗候选株 ，以反向遗传技术构建了H5亚型禽流感疫苗候选 株SF／H5N1，并在鸡胚尿囊腔中连续传代。同时对第 1、6、7和 l0代病毒的全基因组序列进行了分析和发生点突变片 段的结构模拟。结果均表明，HA片段 138位丙氨酸(A)向丝氨酸(S)的突变与重组病毒SF／HSN1在鸡胚传代过程中 繁殖性能升高相关。对不同来源重组病毒LF／H5NI进行 A138S突变，产生了相似的效果。并且，A138S突变未明显 改变重组病毒的抗原性和对鸡胚的致病力。因此，A138S突变对 H5亚型禽流感疫苗候选株的鸡胚适应性具有重要影 响，在疫苗生产中具有应用价值。 关键词：禽流感病毒 ；反向遗传；疫苗 ；病毒繁殖 中图分类号：$851．34 7．2 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1302(2011)03—0038—04 禽流感病毒(AIV)属于正黏病毒科 A型流感病毒属，表 体，单体间通过非共价键在病毒囊膜表面形成 1个三聚体 。 面糖蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)分别有 16种和9 HA1上具有受体结合位点(RBS)，RBS呈口袋状 ，位于 HA1 种 J。其中，高致病禽流感(H5和H7亚型)在世界范围内给 的球区末端，包括 口袋底部 (98和 153位)、后壁 (183、190和 养禽业造成了巨大的经济损失，同时给人类健康带来严重的 194位)、前壁 (131—137位)、左侧 (225～228位)和右侧 (长 威胁。截至2011年3月25日，H5N1亚型高致病性禽流感在 槽形以155位结尾)。HA1有5个抗原决定簇 ：A区由140～ 全球已经至少导致了316例人的死亡 。近年来 ，在我国的 146及 133—137位氨基酸组成 ；B区由156～160及 187～198 禽流感控制过程中，疫苗接种仍是主要的措施之一。我国正 位组成；C区位于53、54、275和278所在区，并由52位与277 在使用的H5亚型禽流感疫苗株 RE一4和RE一5均是通过 位间的双硫键形成膨胀部；D区由207、174位等表面氨基酸 反向遗传技术产生的重组病毒，其表面蛋白HA和NA来源 组成；E区由63、78、8l和83位表面氨基酸组成 。 于流行毒株。鸡胚培养流感病毒的方法是Burnet等在 20世 本研究的首要 目标是鉴定SY来源重组病毒SF／H5N1在 纪30年代提出的 。在鸡胚中进行流感病毒的传代，可以提 传代适应鸡胚培养的过程中发生的氨基酸位点变化。其次， 高流感病毒对鸡胚的适应性 ；但这种适应性的根本机制仍 探讨此氨基酸位点突变是否引起蛋白结构的变化，是否能提 不是很清楚。目前，已有细胞培养来源人流感疫苗的出现；但 高不同来源重组病毒在鸡胚中的繁殖性能。最后 ，因为抗原 大规模的H5亚型禽流感疫苗生产仍使用鸡胚。因此，加深 的保守性在疫苗生产中是非常重要的，所以又验证了此位点 对重组疫苗株在鸡胚中繁殖适应性分子机制的理解，并获得 变化对抗原性的影响。 在鸡胚中的高产疫苗株，对 目前的禽流感疫苗生产具有重要 1 材料与方法 意义。 流感不同亚型的HA片段长度有所差异，约 1742—1778 1．1 试剂、病毒和细胞 个碱基，编码 562～566个氨基酸。其分为2个部分：重链 病毒A／