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2009年第 1期 牡 丹江师范学院学报 (自然科学版) No．1，2009
(总第 66期) JournalofMudanjiangNormalUniversity TotalNO66
两种质粒DNA纯化方法的比较
滕 云
(黑龙江林业职业技术学院生态工程系 ．黑龙江 牡丹江 157012)
[中图分类,e~-lQ751 [文献标IR~]A [文章ft[1-~]1003--6180(2009)01—0028--02
质粒是染色体外能够进行 自主复制的遗传单 入到容量为 15mL的试管中，接人平板上繁殖 的
位 ，在基因构建中常被用作基因的载体，实验中经 单菌落 ，于 37oC 250rpm 培养过夜．分两次将 2
常使用碱裂解法提取质粒．本实验对应用经典纯 mL培养物收集到 1．5mL离心管中，用微量离心
化方法和离心柱吸附纯化方法提取的质粒进行了 机于4℃，12000g离心30 收集菌体．用吸头小
对 比，结果表 明，离心柱吸附纯化方法提取质粒更 心吸去残 留培养液 ，使细菌沉淀 ，尽可能干燥．当
快捷、更高效 ，是质粒提取 的最理想方法． 液体从管中吸出时，尽可能使吸头远离细菌沉淀．
1．2．2 质粒的提取
1 材料与方法 经典纯化方法提取质粒[1] 将细菌沉 淀重
1．1 材料 悬于250 L用冰预冷 的溶液 I中，剧烈振荡．加
250 LP2，盖紧管 口，轻柔颠倒离心管 5次．加
1．1．1 质粒和菌株
350 L用冰预冷的溶液 Ⅱ，盖紧管VI，混匀 ，置于
使用 pBluescriptSK(+)(PBS)质粒 ，大肠杆
冰上 3～5min．4℃，12000g离心 5min，将上清
菌菌株 (E．coliDH5a)．
液 (700uL)转移到另一离心管中．上清液 中加入
1．1．2 试剂
等体积酚，振荡混匀 ，4℃，12000g离心 5min，
溶 液 I：50mmo!／L葡 萄糖 ，25mmol／L 将上清液 650 L转移到另一离心管中．上清液中
Tris— Cl(pH 8．0)，10mmol／L EDTA (pH 加入等体积的氯仿，振荡混匀 ，4℃，12000g离
8．0)，高压下蒸气灭菌 15min，储存温度 4℃． 心 5min，将上清液 550 L转移到另一离心管
P1：溶 液 I高压 灭 菌 后 加 入 10mg／mL 中．上清液中加入 2倍体积的无水 乙醇或等体积
RnaseA，使其浓度达 100Fg／mL，储存温度 4℃． 的异丙 醇 ，混 匀后 在室 温下放置 10min．4 。C，
P2：0．2mol／LNaOH(临用 前用 10mol／L 12000g离心 5min．小心吸去上清液 ，将离心管倒
储存液稀释)，1 SDS． 置于一张纸 巾上 ，使所有液体流出．此时能看到管
溶液 1I：5mol／L 乙 酸钾 6OmL，冰 乙酸 的底部有 白色沉淀．加入用 1mL7O 乙醇冲洗
l1．5mL，水 28．5mL． 沉淀，4℃，12000g离心 2min．弃上清液 ，用枪头
P3：乙
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