松材线虫SCAR标记检测方法的建立与应用.pdfVIP

第lO卷第5期 黄山学院学报 V01．10．NO．5 2008年10月 JournalofHuangshanUniversity 0rI．2()08 松材线虫SCAR标记检测方法的建立与应用 苏胜荣1一，陈凤毛1,2，叶建仁1,2 (1．南京林业大学森林资源与环境学院，江苏南京210037；2．南京林业大学江苏省有害生物预防与控制重点实验室， 江苏南京210037；3．黄山学院生命与环境科学学院，安徽黄山245041) 摘 要：对南京林业大学开发的松材线虫SCAR标记检测方法的操作过程进行了规范化。介绍了 反应程序等，对检测结果的判读方法进行了规定。规范化的检测方法灵敏度高，特异性强，应用方便。 关键词：松材线虫；SCAR标记：检测方法 中图分类号：$763 文献标识码：A 文章编号：1672-447X(2008)05-0057-03 wilt 松材线虫病(pinedisease)是由松材线虫学森林保护研究所)组成成分如下： (Bursaphelenchus (1)DNA提取试剂：线虫裂解液。 xylophilus)弓I起的一种松树毁灭性 病害。该病在我国的远距离快速扩散的态势已引起 国家林业主管部门以及相关研究机构的高度重视。 组合(E：液)，PCR扩增混合液(D液)。 加强对该病害的检疫工作以及开发相应的快速检 疫检测技术是防止该病害进一步跳跃式蔓延的重 染料(H液)、载样液(I液)。 要举措。针对病原松材线虫形态鉴定这一技术难 (4)松材线虫DNA阳性对照(Y液)。 题，南京林业大学森林保护研究所已开发出一系列 引物组合A(E。液)与引物组合(E：液)具有很 松材线虫分子检测技术，并已通过江苏省科技厅组 强的特异性以及非常高的灵敏度。【lJ 织的科技成果鉴定。其中松材线虫SCAR标记检测1．3试验用线虫 方法已在我国南方多省推广应用。本文主要对松材 试验线虫有22个株系。均保存于南京林业大学 线虫SCAR标记检测操作方法进行了规范化。以便森林保护学线虫基因资源库。其中11株为来自全 生产上应用。 国不同疫区的松材线虫。11株为来自多个省份的非 松材线虫。 1材料与方法 1．4线虫基因组DNA的提取 (1)将线虫分离液充分混合。吸取201xl线虫混 1．1主要仪器 合液于Eppendorf管中： 基因扩增仪、高速离心机、凝胶成像系统(或紫 (2)加入20p,LDNA提取试剂A液； 外透照仪)、电泳仪、微波炉等。 (3)加入21．d预冷的DNA提取试剂B液； 1．2试剂 松材线虫SCAR标记检测试剂盒(南京林业大条件下保温处理35min后，再在95。(2条件下保温处 收稿日期：2008—09-08 基金项目：国家自然科学基金资助 作者简介：苏胜荣(1967-)。安徽滁州人，南京林业大学森林资源与环境学院博士研究生．研究方向为森林病理学。 万方数据 ·58· 黄山学院学报 2008年 理lOmin： 2．2引物组合E：扩增结果 引物组合E：扩增图谱如图2昕示。来自不同疫 (5)12000rpm离心3min，上清液(即DNA模 板)用于扩增或放置于冰箱中保存备用。