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维普资讯 江苏农业科学 2006年第3期 一 l9l一 阴沟肠杆菌W一1粗酶液对氯氟氰菊酯的降解 效果及其作用机理 林 淦，姚 威 (湖北省襄樊学院化学与生物科学系，湖北襄樊441053) 摘要：阴沟肠杆菌w—l中提取的粗酶液 ，具有氯氟氰菊酯水解功能，研究了其对氯氟氰菊酯的降解特性和 作用机理。研究结果表明，在35℃、pH值7．5时对氯氟氰菊酯显示最大的降解活性，对20mg／L氯氟氰菊酯的 降解率为83％。经实验测定，氯氟氰菊酯水解最大降解速率 为 163．93nmo／／(ml·min)，米氏常数 为 1167．80nmol／ml。氯氟氰菊酯在粗酶液作用下，水解产物为o【一氰基一3一苯氧基苄醇和2，2一二甲基 一3一(2 一 氯 一3，3，3一三氟 一1一丙烯基)环丙烷羧酸。 关键词 ：阴沟肠杆菌；氯氟氰菊酯；粗酶液 中图分类号：Q814．1 文献标识码：A 文章编号：1002—1302(2006)03—0191—02 氯氟氰菊酯具有极强的胃毒和触杀作用，杀虫 内含 100ml富集培养基的锥形瓶中，30℃摇床培养 广谱，杀虫作用快，持效长，主要用于防治农作物上 72h；将发酵培养后的菌液 7500r／min离心 10 的害虫。 《中华人民共和国农药管理条例》规定氯 min，获得菌体，然后用 pH值 7．0的磷酸缓冲液洗 氟氰菊酯在农产品中的残留量≤0．2mg／kg，所以， 涤2次，按3ml缓冲液 ：1g菌体的比例配成菌悬 无公害农产品生产过程中必须严格控制氯氟氰菊酯 液，置于冰浴中用超声波细胞粉碎机 (200W)超声 的残留量。微生物酶对于土壤和水中农药的降解具 波破碎处理7次，每次50s。而后 10000r／min离 有重要作用，目前已分离到许多能降解或转化农药 心10min，取上清液，得菌细胞粗酶液 ¨ 。 的微生物酶，并证实了是环境污染治理的重要途径 1．3 酶活力测定 ] 之一，显示出良好的应用前景。本实验室现已从土 反应体系统一为：35℃预热的pH值7．5的含 壤中分离到一株阴沟肠杆菌W一1，经证实该菌株对 氯氟氰菊酯农药20mg／L的磷酸缓冲液2．7nll中， 氯氟氰菊酯具有一定的降解作用，从其培养物中提 加35℃预热粗酶液0．3ml，总体积为3ml，在35℃ 取的酶液对氯氟氰菊酯具有较好的降解效果。本试 电热恒温水槽 中水浴反应 1h后加 0．2ml1．0 验研究了阴沟肠杆菌W一1产生的酶对氯氟氰菊酯 mol／LHC1溶液终止酶反应。每一处理重复 3次， 的降解特性以及该酶的作用机理。 以不加酶液的氯氟氰菊酯农药的缓冲液为对照。用 石油醚萃取3次，定容至 10ml，用气相色谱测定含 1 材料与方法 量，求得酶对农药的降解率。 1．1 菌种 1．4 pH值对酶活的影响 分离株W一1，现已鉴定为阴沟肠杆菌 (Enter- 将酶液与氯氟氰菊酯农药在pH值为4．0、5．0、 obactercloacae)。 5．5、6．0、6．5、7．0、7．5、8．0、9．0、10．0的缓冲液中 1．2 胞 内酶粗酶液的制备 35℃反应 1h，各对应pH值梯度分别以不加酶液的 分离株W一1接种于普通培养基中，30℃培养 为对照，通过测定不同pH值条件下的酶活力，确定 过夜。经过24h活化以后，新鲜菌液接种于 15个 酶的最适反应pH值