重组质粒DNA D-GPEi工程菌发酵工艺的优化.pdfVIP

维普资讯 · 150 · 中国生物制品学杂志2OO8年 2月第 2l卷第 2期 ChinJBiologicalsFebruary2OO8，V01．2l N0．2 中国图书分类号 1Q≯20．6 QTS 文献标识码 A 文章编号 l004．ss03(20帱)0 l5o-03 【实验技术 】 重组质粒 DNAD．GPEi工程菌发酵工艺的优化 殷玉和 高冷 吴丛梅 李东风 【摘要 】 目的 优化重组质粒D-GPEi工程菌发酵工艺条件。方法 控制相关发酵参数，观察溶解氧浓度、比生长速率 和培养时间对工程菌生长和质粒浓度的影响。结果 发酵培养对数生长期溶解氧浓度控制在 30％～50％。补料前比生长速 率为0．5—0．7／h，6h开始补料 ，比生长速率下降，12h后比生长速率为0．1—0．2／h。连续发酵3批工程菌，21h后收集菌体 ，得 到菌体平均产量为89．4 L(A=52．6)，质粒平均产量为359．8mg／L。3批工程菌浓度和质粒拷贝数差异无显著意义。结论 此发酵工艺得到工程菌浓度和质粒拷贝数较高，重复性好，适用于大规模工业化生产。 【关键词】 工程菌；发酵工艺；质粒DNA；溶解氧浓度；比生长速率 OptimizationofFermentation ProcedureforRecombinantE．coliStrain with D- GPEiPlasmidDNA YINYu-he，GAOLeng，WUCong-mei，etal(Ctu~chunUniversityofIndustry，Changchun130012，Chn／a) A【bstract】Objective Toptimi~afermentationprocedureforrecombinantE．colistrainwithD-GPEiplasmidDNA．MethodsOb． servetheinfluenceoffermentationparametersincludingdissolvedoxygenconcentration，specificgrowthratenadculturetimeonhtegrowthof recomb inantE．co／／strainandhteconcentrationofplasmid．Results Theoptimaldissolvde oxygenconcentrationforfermentationwas30％ 一 50％ ．Thefde batchwasstartde 6hafterfermentation．Thespecfiicgrowthrateofrecomb inantE．co／istrainWas 0．5～0．7／hbeforefde batch htendecreasedsignificnatlyto0．1～0．2／h12hafterfermentation．Theyieldofbacteria21hafterfermentationWas89．4g／L(A=52．6)，nad thatofplasmidWas 359．8mg／L．I]lreeCO~ UtiVebatchesofrecomb inantE．co／istrainswerefermentde bytheprocdeure，nadhteresults showde nosignificnatdifferenceinbacterialconcentrationorhtecopynumbersofplasmids．Clllchl~Oll Byhtedevelopedfemr entationproee— dure． ghbacterialconcentrationnadplasmidcopynumberwereobtainde ．Theprocdeureshowde gode reproducibilitynadWas suitablefor large-scaleproduction． K【eywords】 RceombinantE．coli；Femrentationprocdeure；PlasmidDNA；Dissolvdeoxygenconcentration；specfiicgrowthrate 近几十年来 ，由于重组大肠杆菌表达体系的发