猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因重组腺病毒的构建及特性研究.pdfVIP

维普资讯 2008年 2月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第 43卷 第 1期 I～6 JOURNAL0FGANSU AGRICULTURALUNIVERSITY 双 月 刊 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因重组腺 病毒的构建及特性研究 马友记h。，赵兴绪。，黄连清 ，李发弟。，程小磊。，柳纪省 (1．中国农业科学院兰州兽医研究所 ，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，农业部畜禽病毒学重点 开放实验室，甘肃 兰州 730046；2．甘肃农业大学动物科学技术学院，甘肃 兰州 730070； 3．中农威特生物科学技术股份有限公司，甘肃 兰州 730046) 摘要：将克隆到的猪繁殖与呼吸综合征病毒全长GPs基因插入到 pAdTrack--CMV穿梭质粒 中．再将重组质 粒 pAdTrack--CMV／GP用 PnieI线性化后 电转化携带有腺病毒骨架载体 pAdeasy-- 1的大肠杆菌 BJ5183感受 态细胞 ，经细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒 pAdEasy--GPs，经酶切充分暴露反向末端重复序列，再与脂质体 混合转染 AD一293细胞．成功获得了AD—GP复制缺陷型腺病毒，经检测证实 AD—GPs稳定性好．安全性高．转 录水平检测证实，GP蛋 白基因得到了转录 ；荧光检测发现，外源蛋 白已得到表达． 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ；GP5；重组腺病毒 ；同源重组 中圈分类号：Q784 文献标识码 ：A 文章编号：1003—4315(2008)01—0001—06 Constructionandcharacterizationofrecombinantadenoviruswith porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusGP5 MA You-ji ，ZHAOXing—XU ，HUANGLian-qing，LIFa-di，CHENGXiao-lei。，LIU ji—xing (1．StateKeyLaboratoryofVeterinaryEtiologicalBiology，StateKeyLaboratoryofVeterinaryEtiologicalBiology．Lanzhou VeterinaryResearchInstitute．ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Lanzhou730046，China；2．CollegeofAnimal ScienceandTechnology，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China；3．Chinaagricultural VeterinaryBiotechnologyCompany，Lanzhou730046，China) Abstract：Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome(PRRS)isoneofthemostimportantdiseases thataffecttheswineindustrynowadays．TheGP5geneofPRRSviruswasclonedandthensubclonedinto adenovirusshuttlevectorspAdTrack--CMV，andthetransfervectorpAdTrack--CMV／GP5wasconstruc— ted．Afterbeinglinearized，thepAdTrack--CMV／GP5wastransformedintotheE．co