柔嫩艾美耳球虫地克珠利与马杜霉素耐药株的3种同工酶分析.pdfVIP

第40卷 第2期 上海师范大学学报 (自然科学版) Vo1．40．No．2 2011年 4月 JournalofShanghaiNormalUniversity(NaturalSciences) Apr．，2011 柔嫩艾美耳球虫地克珠利与马杜霉素 耐药株的3种 同工酶分析 郭 涛 ，董 辉2，黄 兵 ，赵其平2，韩红玉2， 姜连连2，李 洋2，平宪卿2，朱顺海2 (1．上海师范大学 生命与环境科学学院，上海200234；2．中国农业科学院 上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241) 摘 要：采用聚丙烯酰胺凝胶 电泳对柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)药物敏感株、地克珠利 耐药株、马杜霉素耐药株以及 2个耐药株重组体的乳酸脱氢酶 (LDH)、磷酸葡萄糖异构酶 (GPI)和葡萄糖 一6一磷酸脱氢酶(G6PD)同工酶进行了分析．结果显示：在LDH同工酶谱中， 敏感株有一条浓带，3株耐药株均没有酶带；在GPI同工酶谱 中，敏感株有4条带，地克珠利耐 药株有GP1-2和GPI-4，而马杜霉素耐药株和重组体均含有GP1-2、GPI一3和 GPI-4；在G6PD 同 工酶谱中，敏感株有4条带，而3株耐药株均只有G6PD．3和G6PD-4．同工酶分析表明，药物敏 感株与3株耐药株之间的3种同工酶均有差异．3株耐药株之间的GPI存在差异，而在LDH和 G6PD无差异． 关键词：柔嫩艾美耳球虫；地克珠利；马杜霉素；耐药性；同工酶 中图分类号：$855．9 文献标识码 ：A 文章编号：1000-5137(2011)02-0197-05 O 引 言 鸡球虫对药物产生耐药性，体内的一种或数种同工酶会发生结构或理化性质上的变化，继而出现相 应的特征性同工酶谱 ，因此可用同工酶技术鉴定不同的耐药虫株．在已报道的16种鸡球虫同工酶中，常 用于球虫耐药性虫株鉴定的同工酶主要有乳酸脱氢酶 (Lactatedehydrogenase，LDH)、葡萄糖磷酸异构酶 (Glucosephosphateisomerase，GPI)和葡萄糖 一6一磷 酸脱氢酶 (Glucose-6．phosphatedehydrogenase， G6PD)J．本文作者采用聚丙烯酰胺凝胶 电泳技术，对柔嫩艾美耳球虫(Eimefiatenella)药物敏感株、地 克珠利耐药株、马杜霉素耐药株以及用基因重组法筛选到的对地克珠利和马杜霉素同时具有抗性的重 组体虫株的LDH、GPI和G6PD分别进行了同工酶谱分析，观察各虫株的同工酶谱变化情况． 1 材料与方法 1．1 虫 株 柔嫩艾美耳球虫敏感株 、柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株与马杜霉素耐药株 、柔嫩艾美耳球 虫地克珠利耐药株与马杜霉素耐药株重组体…，均由本实验室分离、诱导、筛选与保存． 收稿 日期 ：2010-07．15 基金项 目：国家 自然科学基金项 目 作者简介：郭 涛 (1983一)，女，上海师范大学生命与环境科学学院硕士研究生；黄 兵 (1958一)，男，中国农业科 学院上海兽医研究所研究员，上海师范大学生命与环境科学学院兼职教授． 通信作者 上海师范大学学报 (自然科学版) 2011正 1．2 同工酶样品制备 1．2．1 卵囊的收集与孢子化 取无球虫鸡，分别接种4株柔嫩艾美耳球虫，接种剂量为孢子化卵囊4x10爪／只．接种敏感株组 的饲料不添加任何抗球虫药物；接种地克珠利耐药株和马杜霉素耐药株组的饲料，在接种前 1d分别添 加地克珠利和马杜霉素，至试验结束；接种重组体组的饲料，在接种前 1d添加地克珠利和马杜霉素，至 试验结束．收集接种后第6～8d的粪便，加入适量水混合后，依次经80目、160目铁纱网过滤．滤液经 2500r／min离心 10min，弃上清，再加水离心，重复3～5次．沉淀中加入适量2．5％重铬酸钾溶液，混匀 后置 28~C恒温培养箱中培养48—72h．显微镜检查孢子化率达90％以上停止培养，保存于4~C冰箱 备用． 1．2．2