化学品 蛙类非洲爪蟾胚胎致畸试验.docVIP

目 次前 言 III 1 范围 4 2 术语、定义和缩略语 4 3 方法局限性说明 4 4 测试方法说明 4 4.1 标准概要 4 4.2 重要性及使用 5 4.3 安全防范 5 5 设备与材料 5 5.1 仪器设备 5 5.2 可接受性 6 5.3 培养成年非洲爪蟾所用水 6 6 FETAX试验溶液 7 6.1 要求 7 6.2 配方制定 8 7.试验物 8 7.1 一般性 8 7.2 储备液 8 8 受试生物 9 8.1 物种 9 8.2 来源 9 8.3 成年的动物 9 8.4 繁殖 9 8.5 胚胎 9 9 试验程序 10 9.1 试验设计 10 9.2 温度和pH值的调整 10 9.4 换 12 9.5试验的持续时间 12 .6外生的代谢激活系统（MAS） 12 .7 生物数据 13 1分析方法 15 1．试验的可接受性 15 1.试验报告 16 附录A（资料性附录）可选择的物种 17 A.1 使用其他物种 17 A.2 推荐的无尾两栖类 17 18 B.1 附加数据 18 .2其他的暴露 18 20 附录D（资料性附录）微粒体的分离试剂和NADPH系统组件 21 .1 缓冲液: 21 .2 联合储备液 21 D.3 抗生素 21 22 表1 部分金属的推荐最大浓度 7 表2 维生素A的推荐浓度 10 表3 96 h时畸形记录表 14 表C.1 不同浓度下寻找范围试验 20 表D.1 联合储备液 21 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准技术内容与美国标准测试与材料协会（ASTM）化学品测试导则 ASTM E1439-98（2004修订）《非洲爪蟾胚胎致畸试验的标准指南(FETAX)》（Standard uide for Conducting the Frog Embryo Teratogenesis Assay – Xenopus (FETAX)）技术内容一致。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中国科学研究院生态环境研究中心。 本标准主要起草人：陈会明、秦占芬、程艳、韦荣国、崔媛、苏红巧、李晞。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 1 范围 本标准规定了化学品蛙类非洲爪蟾胚胎致畸试验的方法。 本标准适用于化学品蛙类非洲爪蟾胚胎致畸试验。 2 术语、定义和缩略语 下列术语定义缩略语适用于本标准。2.1 the frog embryo teratogenesis assay – Xenopus FETAX 非洲爪蟾胚胎致畸试验。 2.2 半数致死浓度 LC50 引起50%的受试胚胎死亡的受试物浓度，以 LC50表示。 2.3 半数致畸浓度 EC50 引起50%的受试胚胎畸形的受试物浓度，以EC50表示。 2.4 致畸指数 TI TI =（96h-LC50）/（96h-EC50）。TI是对发育危害的测量[1]。TI值高于1.5意味死亡率和畸形浓度范围有着大的分离，因此，没有胚胎的重大死亡率，意味着所有胚胎潜在的畸形率更大。 3 [2]。经过一些必要的修改，也可以运用到其他蛙类和一些可供选择的无尾两栖类物种。可见附录A。 3.2 本标准规定了半静态的暴露方案，死亡、畸形和生长抑制数据的收集方法。特殊的要求和环境可能需要不同的暴露方式和涉及其他影响的数据。附录B列出了部分可能会需要的修正参数。试验参数一旦修正，修正前后的数据将无任何可比性。在最后的试验报告中，对修正的参数应该详实的记录。 本标准适用于所有类型的化学品，如工业用和民用的化学原料，中间体、产品等单分子化合物，聚合物以及不同化学物组成的混合剂与产品。经适当的改进，本试验可用于检测下列因素的发育毒性：物理因素如温度、溶解氧、pH值等；水相样品如废水[2]、地表水和地下水、沥出液，水不溶原料的提取物等；固相样品如土壤和沉积物、颗粒物、沉淀物、及大块的土壤和沉积物等4 测试方法说明 4.1 标准概要 FETAX试验要求每个试验材料都测距并重复进行三次。空白对照试验用于提供： a）通过胚胎的质量，FETAX溶液的适宜性，试验条件和试验过程，控制试验的可接受性； b）解释处理组胚胎数据的基础试验，受试物设置不同的暴露浓度，每个浓度设置两个平行。每个受试物重复的三次试验，胚胎必须来自不同的雌雄配对的非洲爪蟾。试验应该设置一个参考毒物（6-氨基烟酰胺）进行质量控制。96h-LC50和96h-EC50通过概率分析计算。TI=（96h-LC50）/（96h-EC50）。生长抑制通过测量每个浓度暴露组胚胎头-尾的长度，并比较各浓度组