大头蛙和脆皮大头蛙线粒体3个基因的测定及两栖类亲缘关系研究.pdfVIP

维普资讯 第 31卷 第6期 水 生 生 物 学 报 Vo1．31．No．6 2007年 11月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA NOV．，2 0 0 7 大头蛙和脆皮大头蛙线粒体 3个基因的测定及两栖类亲缘关系研究 张际峰 ，2 聂刘旺 王 洋 郝培应2 (1．安徽师范大学生命科学学院，芜湖 241000 2．淮南师范学院化学生物系 ，淮南 232001) 摘要：现存的两栖类系统发生关系一直存在争议，特别是3个 目间的亲缘关系。本文设计了5对引物，扩增和测定 了大头蛙和脆皮大头蛙线粒体 12S和 16SrRNA基因和 Cytb基因的全序列 。在对所测序列进行分析的同时，基于 3 个基因全序列的相加数据 ，运用 MEGA3．1和PHYLIP3．64软件 中的 NJ法、MP法和 ML法 ，对两爬类 17个物种 ，以 鱼类非洲肺鱼为外群，重建出3个树形完全一致的分子系统树。研究结果显示：现存两栖类中无尾 目和有尾 目为 姐妹群关系，并推断有尾 目内小鲵科和隐鳃鲵科亲缘关系较近。此外，在研究两栖类系统发生关系方面，作者分析 前人研究中产生两种不 同观点的可能原因，同时总结了在此类研究中产生偏差的几种影响因素 。 关键词 ：两栖类 ；大头蛙 ；12S和 16SrRNA基 因；Cytb基 因；系统关系 中图分类号 ：Q781；Q959．5 文献标识码 ：A 文章编号：1000．3207(2007)06．0822．07 现存两栖类可分为体形迥异的3个 目，分别为 l 材料与方法 蚓螈 目(Gymnophiona)、有尾 目(Caudata)和无尾 目 1．1 实验材料 大头蛙采 自云南省思茅地区，编号 (Anura)，共包括 40个科-1 j。两栖类 的体型特征 为20 ，雌性 ；脆皮大头蛙采 自海南 吊罗山，编号为 及其在生物进化过程 中的重要地位 ，吸引了国内外 5 ，雄性。 许多学者从形态学、分子生物学等方面来研究两栖 1．2 总 DNA的提取和检测 选用新鲜的蛙腿部肌 类的起源 、3个 目及各科问的系统发生关系_3 j。 肉，采用 SDS／蛋白酶裂解，酚氯仿提取总 DNA，琼脂 与一些学者所持 的多起源观点_7 j相反 ，被更 糖凝胶电泳检测。 广泛接受的观点认为两栖类为单系起源 [10--13]。同 1．3 引物设计和 PCR扩增 参 照泽陆蛙 (Fejer— 时现存两栖类 3个 目的系统发生关系仍然存在争 varyalimnocharis) 和 黑 斑 蛙 (Rana nigroma~ula． 议_6’l，主要有两种观点 ：一种认为有尾 目和无尾 目 ta)_19j的线粒体 DNA全序列(GenBank登录号分别为 的亲缘关系较近_1l，j，另一种认为有尾 目和蚓螈 目 为姐妹群关系_5’l。此外，在有尾 目内小鲵科、蝾螈 NC．005055和 AB043889，以下 同)，运用 Oligo6．0软 科和隐鳃鲵科三者的系统关系也没有统一意见_3j。 件设计可覆盖大头蛙和脆皮大头蛙线粒体 12S和 大头蛙属动物 Limnonectes(Ranidae)主要分布于 16SrRNA及 Cytb三个基 因全序列的引物 5对