重编程因子对小鼠组蛋白H3K427甲基化酶基因启动子活性影响.pdfVIP

摘要 摘要 表观遗传修饰主要是研究在DNA序列不发生改变的前提下可遗传基因的表达发 生的改变，组蛋白修饰己成为表观遗传领域的研究热点。其中组蛋白修饰酶在组蛋白 修饰过程中起着至关重要的作用，而重编程因子可以诱导体细胞重编程成为iPS细胞， 这一过程又是由一系列的表观遗传修饰酶调控的，因此这些重编程因子可能对表观遗 基化在这一过程中起着十分重要的作用，但它们之间具体存在何种联系至今仍不清 楚。因此在本研究中，我们通过启动子分析的方法来研究这些重编程因子对组蛋白三 三甲基化酶Smyd3和Mill的基因启动子，构建了五条Smyd3启动子57缺失片段．pGL3 程因子的重组质粒共转染到HEK293细胞，通过双荧光素酶报告基因检测系统检测 Smyd3和Mill缺失突变体重组质粒荧光素酶报告基因的性对活性。预实验结束后，本 动子各缺失片段的相对荧光活性。之后对小鼠体内受精体内培养的1．细胞、2．细胞、 染组与阳性对照组相比表现出荧光活性，并且Smyd3．4．pGL3的荧光活性最强，是其 它的2至4倍左右， 核心区域可能位于．533-一42 bp之间，在．2026～-．533bp之间可能存在启动子负调控序 列。而引人重编程因子的转染组中，Sox2、Oct4对Mill启动子活性具有抑制作用， 重编程因子对小鼠组蛋白H3K4／27甲基化酶基因启动子活性的影响 N趾og对其活性具有一定的促进作用，而c-Myc和Ⅺf4对其活性几乎没有什么作用； 和Nanog对其活性具有一定的促进作用。 关键词：组蛋白H3K27甲基化H3K27甲基化转移酶启动子分析重组质粒构 建共转染 II Abstract Abstract modificationisto the of intheDNA Groupepigenetic studyexpressiongenes doesnot modificationshasbecomeahotresearchfieldof sequence change．Histone in modification modification acrucialrole histone enzymeplays epigenetic．Histone of cellsCanbeinducedto factors somatic process，thereprogrammingreprogramming becomeiPS a of enzymes． cells，this regulatedbyvarietyepigeneticmodifying process These factorsbe modificationhasacertain may epigenetic enzyme reprogramming influence．The factors andhistone Oct4，Sox2，Klf4，c-Myc，Nanog reprogramming