中国野生葡萄抗白腐病、炭疽病基因RAPD标记及其克隆.pdfVIP

摘 要 本研究对原产中国的野生葡萄8个种32个株系和欧洲葡萄16个品种、 野生葡萄与欧洲葡萄栽培品种的种间杂交F,代杂种工06株及野生葡萄的自交 后代 14株共168份材料进行了果实抗白腐病、炭疽病的田间自然鉴定研究， 并对这些野生葡萄的抗白腐病、炭疽病基因进行了RAPD标记研究。俘要结果 如下: 1.中国野生葡萄8个种32个株系在田间自然鉴定条件下抗白腐病的表 现形式是丰富多样的。首先，种间抗病性存在着明显的差异:抗病的种有刺 葡萄、山葡萄、裂叶刺葡萄、秋复叶葡萄，感病的种有毛葡萄。其次，在秋 葡萄、复叶葡萄、华东葡萄、mi奠葡萄种内不同株系间也存在着抗性的差异， 其中抗病的有:复叶葡萄的留坝一8、留坝-9，秋葡萄的江西一1(绿毛)、平利 -2、平利一7、留坝一1，华东葡萄的白河一35-1、白河一13-1,葵莫葡萄的安林- 3;感病的株系有:复叶葡萄的甘肃一91，秋葡萄的留坝一11、江西一2(红毛)， 篓黄葡萄的泰山一1。而在田间自然鉴定条件下，上述的中国野生葡萄都抗炭 疽病，没有种间、种内的差异。 2.根据种间杂交F,代和自交一代的抗性表现与分离的特征，本研究认 为中国野生葡萄对白腐病的抗性不仅存在着抗病的主效基因，而且也存在着 抗病的微效多基因。中国野生葡萄对炭疽病的抗性主要表现为主效基因控制 的遗传，是否存在着抗病的微效基因有待于进一步的研究。 3.欧亚种葡萄品种一般不抗白腐病，但在感病的中国野生毛葡萄83-4- 96(早)X粉红玫瑰 (白诗南)的杂交F,代中，出现了抗感的分离现象，实 验地证明了中国野生葡萄自身也存在着抗病的微效多基因，这些基因具有累 加效应。 4.获得了中国野生葡萄拥有的抗白腐病基因的RAPD标记。PP09-769和 中国野生葡萄拥有的抗炭疽病基因的RAPD标记OPC15-1300. 5.将抗白腐病基因的RAPD标记OPP09-769和抗炭疽病基因的RAPD标记 OPC15-1300回收克隆测序，OPP09-769是由769by组成;因OPC15-1300超 过1000by，故从两端分别测得5‘端为516bp,3’端为516by，进一步通 过亚克隆将获得全部序列碱基组成。 6.根据OPP09-769和OPC15-1300的测序图将RAPD标记转化为SCAR标 记，并进行了验证分析。入 关键词:中国野生葡翰，白腐病，炭疽病，RAPD，克隆，SCAR 致 谢 本文是在尊敬的导师王跃进教授、周鹏教授的悉心指导下完成 的。导师们从论文选题、实验设计、实施和写作等方面给予了详尽 的指导，并在学习和生活诸方面给予我无微不至的关怀。恩师们高 深的学术造诣，严谨的治学态度，忘我的工作热情及开拓创新的科 研精神将使我终身受益，成为我今后工作、生活及做人的楷模。 在开题论证过程中，贺普超教授、李嘉瑞教授、范崇辉教授、 许晖副教授、牛立新副教授、马锋旺副教授、任小林副教授、郭卫 东副教授等提出宝贵的意见及建议。 在葡萄白腐病、炭疽病田间自然鉴定的过程中，曾得到西北农 林科技大学的贺普超教授、程廉教授及果树站和纯诚师傅的关心和 指导，分子生物技术部分在中国热带农业科学院热带作物生物技术 国家重点实验室完成。在论文实施过程中，得到郑学勤教授、金志 强教授、陈守才研究员、黄俊生研究员、张银东教授的关心和指导， 梁启镜先生在生活上给予了诸多关怀。王自章、吴坤鑫、彭世清、 张致礼、彭存志、吴岱飞博士、符少萍女士、杨国锋、赖心田、刘 柱、方再光、田艳硕士等都曾在百忙之中给予了帮助。西北农林科 技大学的刘雅莉老师、张剑侠、王西平、万怡震、张今今、陆璐、 罗素兰博士、李桂荣、潘学军、段朝辉、王劲松、杨英军等同学、 尾惠灵老师都给予了热情的指导和帮助。 本研究是王跃进教授主持的国家自然科学基金项目:中国野生 葡萄资源杭病基因的RAPD标记 及葡萄无核抗病基因 作图及育种研究 的部分内容。 值此论文付梓之际，谨向所有关心，支持和帮助我的师长、领 导、朋友和父母致以最诚挚的感谢! 徐 炎 2000年