神经退行性疾病机制研究.docVIP

华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 摘要 阿 尔 茨 海 默 病 （ Alzheimer’s disease ， AD) 和 帕 金 森 氏 病 （ Parkinson’s disease，PD)是两种最为常见的老年性神经退行性疾病。在这两种疾病中，患者 脑内都对称性丢失了某些特定的神经元，并且这些特定的神经元丢失引起了患者 的运动，感觉或是意识功能障碍。大部分的 AD 和 PD 病例都发生于晚年，表现 为没有明显遗传特征的散发疾病，小部分则呈现为早期发生并与特定基因突变相 关的遗传性病例。这两种疾病的病理发生机制尚不清楚，研究显示基因多态性、 生活环境以及应激等多种因素都可以影响个体的易感性。到目前为止，还没有有 效的药物可以治愈 AD 和 PD。 Tau 蛋白的过度磷酸化是 AD 的一个主要病理特征，而蛋白激酶 A (protein kinase A, PKA) 则是 AD 样过度磷酸化 Tau 蛋白的关键激酶之一。为探讨 Tau 蛋 白的异常磷酸化的机制，我们在大鼠双侧海马内定位注射 PKA 的激动剂异丙去 甲肾上腺素(isoproterenol, ISO)。免疫印迹结果显示，在海马内注射 0.02 μM ISO 能激活 PKA 并能引起 Tau 蛋白在 PHF-1 和 tau-1 等疾病相关磷酸化位点的过度磷 酸化。同时，大鼠脑内还表现出过氧化应激激活的相关指征，如过氧化物歧化酶 的激活及 malondialdehyde (MDA)的升高。 腹腔内预注射褪黑素能部分逆转 ISO 引起的 Tau 蛋白过度磷酸化。低剂量的褪黑素（1mg/kg）连续注射 4 周即能逆转 Tau 蛋白 PHF-1 位点的异常磷酸化。而高剂量的褪黑素（10mg/kg）连续注射 2 周 就能逆转 PHF-1 和 tau-1 两个位点的过度磷酸化。同时，连续 2 周注射 10mg/kg 的褪黑素可以明显地抑制 ISO 引起的 PKA 过度激活、过氧化物歧化酶的激活及 MDA 的升高。我们的研究表明，ISO 引起 Tau 蛋白过度磷酸化的机制可能不仅仅 只是通过激活 PKA，还包括引起过氧化应激。褪黑素则能同时抑制激酶激活和过 氧化应激，从而降低 Tau 蛋白过度磷酸化。 1 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 近年的研究表明，PINK1 基因的突变能导致常染色体隐性 PD， 但 PINK1 的 正常生理功能以及 PINK1 突变引起 PD 的病理机制尚不清楚。我们的研究表明， 用 RNA 干扰的方法基因沉默果蝇的 PINK1 基因可以导致进行性发展的多巴胺能 神经元丢失和果蝇小眼的退行性病变，而过表达人的 PINK1 基因可以逆转所有这 些病理改变。同时，在果蝇体内表达人过氧化物歧化酶 1 也能抑制由 PINK1 基因 沉默引起的神经退行性病变。给果蝇喂食抗氧化剂如过氧化物歧化酶 1 和维生素 E 也能明显地改善果蝇小眼的退行性改变。因此本研究提示果蝇的 PINK1 基因通 过抑制过氧化损伤而起到保护神经元的作用，在因为 PINK1 基因突变而引起常染 色体隐性 PD 的病人中， 则可能由于正常 PINK1 基因功能的丢失而引起疾病。 尽管 PD 患者脑中选择性神经元死亡和 Lewy 小体形成的机制尚不清楚，但 近年来，通过对早发家族性的 PD 病例的分析，已在 PD 的分子遗传学研究方面 取得了重大成果。目前，已发现至少有六个基因与家族性 PD 相关，其中??- synuclein、uchL1 和 LRRK2 基因的突变可导致常染色体显性遗传 PD，parkin、 PINK1 和 DJ-1 基因的突变则导致常染色体隐性 PD。我们的研究表明，parkin、 PINK1 和 DJ-1 形成 E3 泛素连接酶复合体（以下称 PPD 复合体）以促进 parkin 底 物的泛素化及降解。去除 PINK1 或 DJ-1 会导致过量表达的 parkin 底物降解减 少，聚集增加。而 PD 相关的 parkin 和 PINK1 突变能抑制这一 E3 泛素连接酶复 合体的正常功能。我们的研究发现了一个全新的由 parkin、PINK1 和 DJ-1 等 PD 相关基因产物而组成的 E3 泛素连接酶复合体， 揭示了这些疾病基因的相关性和 相互作用性。 同时我们还发现疾病基因突变能抑制正常的 E3 泛素连接酶功能， 从而可能导致疾病。 2 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 关键词： 阿尔兹海默氏病 帕金森氏病 褪黑素 果蝇 PTEN-induced kinase 1 (PINK1) Parkin DJ-1 Ubiquitin proteasomal system E3 连接酶 3 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位