BMP7基因在心肌、脑缺血%2f再灌注中表达变化实验研究.pdfVIP

BMP7基因在心肌、脑缺血／再灌注中 表达的实验研究 中文摘要 前 言 去除矿物质的骨基质，并因其能诱导新骨及骨组织形成而得名。 BMP是通过大的前体蛋白合成的。所有BMP单体的中心结构是由C 一端6个有固定空间间隔的胱氨酸残基组成的胱氨酸结组成。BMP可在 同源性Arg—X—X—Arg位点处被蛋白水解为含羧基的成熟二聚体：根据 BMP分子结构的相似性和差别，已分离出近30种BMP分子。 BMPs分布相当广泛，包括骨、心脏、脑及肾脏等器官。BMPs分泌后与 细胞膜上具有丝氨酸一苏氨酸激酶活性的受体结合，受体II型在结合部位 使受体I型磷酸化并激活其激酶活性，使转录因子Smad膜磷酸化后进入细 胞核后，参与调节靶基因的转录。BMPs是多功能细胞因子，主要参与并调 节细胞增殖和分化、调控细胞凋亡、组织和器官形态发生，参与组织修复等。 BMP7是近年来逐渐引起人们重视的一种BMP蛋白，早在原肠胚早期 就开始在外胚层表面及脊索中，在将发育成前脑的神经上皮、发育成内脏的 基质细胞和眼泡中、以及在心房和心室细胞中并在整个心脏发育过程中均 可被检测到。 近来研究发现BMP7可以减少缺血对肾脏组织造成的损伤，与预防和 治疗脑及其他重要器官缺血／再灌注损伤的关系密切，但机制相当复杂。有 关这方面的研究正逐渐引起人们的重视。本实验建立了脑和心肌急性缺血 基因mRNA和BMP7蛋白在脑和心肌缺血／再灌注过程中表达的变化；同时 在心肌缺血／再灌注过程中应用目前临床常用的静脉麻醉药——异丙酚，观 察异丙酚在心肌缺血／再灌注损伤过程中对BMP7基因表达的影响，从分子 生物学的角度观察和探讨异丙酚抗组织缺血／再灌注损伤的作用，为临床提 供实验依据。本实验包括二部分：一、骨形态构建蛋白7(BMP7)基因在大 鼠脑缺血／再灌注过程中表达变化的研究；二、异丙酚在大鼠心肌缺血／再灌 注过程中对BMP7基因表达影响的研究。 实验材料与方法 一、材料 国医科大学动物实验中心提供。 2．主要试剂：戊巴比妥钠(上海化学试剂采购供应站购得)；逆转录试 剂盒、PCR试剂盒及所需酶类均购自沈阳联星试剂公司。Western blotting 所需羊多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司。其他化学试剂均为国产分析 纯。 AXT0型显微摄像系统(日 切片机(上海)；Olympus显微镜(Et本)；Olympus 本)；Metamorph／Olympus morphimage ST一21型低温离心机(美国)；HEIDOLPHDIAX900型匀浆机(德国)。 pont 二、方法 脉及颈内动脉和颈外动脉分又处，分别结扎颈总动脉和颈外动脉，然后经分 into尼龙线，然后在插入点远端结扎并固定 叉处沿颈内动脉插入4—0，16 尼龙线。这样尼龙线的远端可造成右侧大脑中动脉起始端和后交通支的阻 ·2· 塞，造成该动脉支配区域缺血。缺血2小时后将尼龙线抽出，恢复动脉供 血。而对照组(CC组)仅施行动脉的暴露等假手术，并不造成缺血。大鼠 再灌注12小时后处死，取出脑组织置入液氮中保存。应用反转录一PCR和 注损伤过程中的表达变化。采用TFC染色观察大鼠脑组织缺血／再灌注损 伤的情况。 2．异丙酚在大鼠心肌缺血／再灌注过程中对BMP7基因表达影响的研 醉后仅进行开胸手术；组2为缺血／再灌注组(I组，n=10)：经左胸切口后 剪开心包，在距左冠状动脉根部3mm处以3—0显微线可逆性阻断冠状动 脉血流造成急性缺血，lO分钟后恢复心尖血供；C组和I组的大鼠以0．1ml ·蝇～·min。1的速度持续静脉滴注生理盐水。组3为异丙酚组(P组，n= 10)：此组大鼠在开胸及心肌缺血的实验操作同组2，但在开胸和心肌缺血 过程中持续静脉输注1 集血液标本2ml后处死，取出心尖部位组织置于液氮