双重TaqMan荧光定量PCR在β-地中海贫血产前诊断中的应用.pdfVIP

984 GuangxiMedicafJournaf，Aug．2013，Vo1．35，No．8 双 重 TaqMan荧 光 定 量 PCR在 I3一地 中海 贫 血 产 前 诊 断 中 的应 用▲ 陈碧艳 邓建平 覃 茜 (广西百色市妇幼保健院，百色市 533000，E．mail：bstest2008@sina．com) 【摘要】 目的 建立基因点突变双重TaqMan荧光定量PCR方法，实现p一地中海贫血(B．地贫)高风险胎 儿产前基因诊断快速、准确。方法 以每反应管检测一个位点的突变和野生型基因序列，建立p一地贫基因点 突变双重TaqMan荧光定量PCR体系，检测 3-地贫高风险胎儿绒毛标本6例、羊水标本 32例，根据荧光 PCR 阳性扩增结果结合两荧光通道的ct值差异分析受检标本的基因型，同时以常规 RDB检测为对照，分析与评价 检测结果。结果 6例胎儿绒毛标本中，RDB检测无法判断结果 1例，经该方法检测为野合纯合子；RDB检测 误诊为CD4142合并CD26双重杂合子 l例，经该方法检测为CD41—42杂合子。32例胎儿羊水标本中，RDB 检测无法判断的标本1例，经该方法检测为CD41—42杂合子。该3例标本经重新采集胎儿羊水标本复查，验证 了定量检测结果的准确性。结论 p基因点突变双重TaqMan荧光PCR定量检测方法，可实现B．地贫高风险 胎儿的快速准确产前基因诊断，操作简单快速，结果准确可靠，是较为理想的p一地贫产前诊断方法。 【关键词】 B-地中海贫血；双重TagMan荧光PCR技术；产前诊断；基因型 【中图分类号】 R556 【文献标识码】A 【文章编号】0253．4304(2013)08．0984—05 DoI：10．11675／j．issn．0253—4304．2013．08．07 DualTaqManFluorescenceQuantitativePCRAppliedtoPrenaatlDiagnosisofbeat．Thalassemia CHENBi—yan，DENfian~ing，Qm Qian (MaternalandChildHealthCareHospitalofBaiseCity，BaiSe533000，China) 【Abstract】 Objective ToestablishadualTaqmanfluorescencequantitativePCR(qPCR)methodforpoint mutationdetection，andtorealizethefastandaccurateprenatal diagnosisofhigh—riskfetuswithbeta—t}lalassemia ． M ethods A dualTaqmanqPCRmethodofrbeta．thalassimiapointmutationdetectionwasdevelopedaccordingtothe desing thatmutationandwildtypesequencesofamutationsiteanalyzedinonereactiontube ． Thismethodwasalso appliedtodetect6villiand32amnioticfluidspecimensofhigh—riskfetuswithbeta—thalassemia Thegenotypeofa