一例12号染色体臂间倒位的细胞遗传学研究.pdfVIP

131Th．HEREDITAS．(Beijing)10(6):18-221988 小鼠脾脏与骨髓细胞在微核试验和染色体 畸变分析中的应用 殷学军刘德样黄世友，）王河川 （兰州军区乌鲁木齐总医院遗传室） 由于小鼠骨髓多染红细胞微核 (PCEMN) 不同剂量组分别行背部皮下注射，对照组注射 试验法具有简便快速等优点，在遗传毒理学研 生理盐水。 观察48小时内小鼠反应和体重情 究中得到了广泛应用，但与中期细胞染色体畸 况。待注射 “小时，每 10克体重腹腔注射0.1 变 C（A）分析法相比，能检测的染色体畸变类 ml秋水仙素 （100ag/ml),4小时后处死小鼠， 型较少11〔。虽然小鼠骨髓染色体畸变分析可弥 先取出脾脏剪成3块，放在培皿中的输血滤网 补其不足，但认为难以得到足够的分裂相C2)。自 上，以注射器蕊轻挤研使细胞通过滤网而悬于 Nowell发现植物血凝素 P（HA）在体外有刺 3ml无菌小牛血清内。剥离小鼠后肢两根股骨， 激细胞分裂的能力19I［;Moorhead等建立人外 去股骨头，用无菌小牛血清冲出骨髓细胞于离 周白细胞培养以来33〔,PHA 已广泛用于血细胞 心管中。脾AJ、骨髓细胞悬液先各涂两张玻片， 转化试验。作者受吴氏启发31‘，应用PHA直接 晾千，甲醇固定25分钟晾千，备PCEMN观 注射于小鼠背部皮下，刺激脾胜、骨髓淋巴细胞 察。其余细胞悬液 1000rpm离心，分钟，去上 转化，有效地提高了它们的分裂指数，观察到 清液后加lOml生理盐水再洗一次。加0.075M PHA对脾脏、骨髓 PCEMN和 CA无任何影 KCl10ml充分混匀37℃水浴中低渗25分钟， 响。经丝裂霉素 C(MMC)验证表明，此法可 甲醇：冰醋酸 3（:1)固定4次，每次15分钟，气 同时完成细胞染色体畸变率和微核率两项指标 千法制片。脾脏、骨髓 PCEMN标本均以叮咤 的观察，不仅有利于活体样本中微核 M（N）和 橙 (AO）染色”〔，染色体标本均为常规 Giemsa CA的相关性研究，而且脾脏和骨髓可以相互 染色。每只小鼠脾脏和骨髓的染色体标本分别 替代，为评价被检物的毒理效应提供了方便。 随机计数 10000个细胞中出现的分裂相，以分 裂指数均数 （务）表示。染色体畸变类型的判断 材 料 和 方 法 以人类细胞遗传学命名的国际体制 （1978）非显 一（）动物及试剂 带标本规定的定义为标准，以染色体细胞畸变 动物选用津白I小鼠，体重19-22克。 率 （多）表示。 微核观察于荧光显微镜下进行， PHA，广州制药厂生产 针（剂)oMMC （日本） 以微核细胞率 /（V）表示。 药用粉剂。 2.MMC诱发脾脏、骨髓 PCEMN和 CA 二（）实验方法 的观察 根据前述实验结果 表（1)，小鼠皮 1.PHA对小鼠脾脏、骨髓淋巴细胞有丝 分裂相的影响 动物分7组，每组10只，雌 YsnXuefunelal.:AnalysisofMNandCAin 雄各半，逐一称重。PHA以生理盐水稀释，按 MouseSpleenandBoneMarrow Cells 1)阿克苏市东城医院。 50,100,200,3,00,400,500mg/kg体重 6个 本文于1987年4月2日收至‘ 18 下注射 PHA量取200mg/kg体重，MMC给 药量按标定的 LDso(i.v-5mg/kg体重）的 结 果 与 讨 论 1/2,1/4,1/8,1/16取量，即2.5,1.25,0.625, 一（）不同剂盆PHA 刺激小鼠脾脏、骨 0.3125mg/kg体重。考虑到MMC诱发 DNA 髓细胞的分裂指数 损伤通常是在S期的特点73〔，按 Heddle推荐的