动物源性肠出血性大肠杆菌O157：H7及其3个毒力基因的多重PCR快速检测研究.pdfVIP

中 国人兽共患病学报 686 ChineseJourna1ofZoonoses 2013，29 (7) DOi：10．3969／cjz．j．issn．1002—2694201307009 动物源性肠出血性大肠杆菌 O157：H7及 其3个毒力基因的多重 PCR快速检测研究 陈雅君 。，王亚宾 ，张莉娟 ，张龙现 ，陈丽颖 ，刘中原 ，申 果 ，胡 慧 ，。 摘 要 ：目的 建立快速 、特异的分离鉴定大肠杆菌 0157：H7及其 3个主要毒力基 因(hylA、eaeA 和 stx2基 因)的多重 PCR方法 。方法 根据 GenBank公布 的大肠杆菌 O157：H7菌体抗原 rfbE基 因、鞭毛抗原fliC基 因、溶血素 (hlyA)基 因、 紧密黏附素(eaeA)基 因和志贺样毒素2(stx2)基 因为靶基 因，设计 5对特异性引物，在 同一扩增体系 中进行 PCR，优化反应 体系，测定特异性和灵敏度 ，并进行 了临床样 品的检测 。结果 该方法扩增 目的基 因片段分别为 327bp、247bp、494bp、384 bp和 779bp，特异性和灵敏度均高，细菌纯培养物的检测灵敏度为 10cfu／mL。结论 初步建立 了快速 、灵敏、特异的检测肠 出血性大肠杆菌O157：H7及其3个毒力基 因的多重PCR方法，可用于l临床动物携带大肠杆菌O157：H7的分子流行病学 调查及食 品微生物检测 。 关键词 ：动物源性；肠 出血性大肠杆菌O157：H7；毒力基 因}多重 PCR 中图分类号 ：8855．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1002—2694(2013)07—0686—06 Detectionofanimal-derivedEscherichiacoli0157 ：H7 anditsthreevirulencegenesbymultiplexPCR technique CHEN Ya—jun’，WANG Ya—bin ，ZHANGLi—juan ，ZHANG Long～xian， CHEN Li—ying ，LIU Zhong—yuan ，SHEN Guo ，HU Hut。 (1．CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China； 2．InternationalFederationofZoonoticDiseaseLaboratoryofHenanProvince，Zhengzhou450002，China) ABSTRACT：A multiplexPCR methodwasdevelopedforrapid and specificdetection ofEscherichiacoltO157：H7and threeofitsvirulencegenes (hylA ，eaeA andstx2genes)．Fivesetsofprimersweredesignedaccording tothesequencesof rfbEgene，fliCgene，hemolysingene(hlyA)，inthningene(eaeA)，andshiga—liketoxingene2(stx2)ofE．coltO157．They wereselectedandaddedintooneamplificationsystem toperform PCR．Thesystem wasoptimized，andthespecificityandsen— sitivityofthissystem wereevaluatedandusedtodetecttheclinicalisolates．Theassay wasdesignedtoamplifythe327bp， 247bp，494bp，384bp，and779bpregionsofcorrespondinggenesrfbE，fliC，hlyA，eaeA andstx2．Theresultwashighly sensitiveandsp