甜瓜ACC 氧化酶反义基因植物表达载体的构建及转化烟草的研究.pdfVIP

维普资讯 西北植物学报 ，2005，25(2)：262 268 ActaBot．Borea1．一0ccident．Sin． 文章编 号 ：1000—4025(2005 甜瓜ACC氧化酶反义基因植物表达载体的构建 及转化烟草的研究 黄永红 ，陶兴林 ，陆 璐 ，赵长增 (1甘肃农业大学 农学院园艺系．、州 730070；2中国热带农业科学院热带生物技术研究所 热带作物生物技术 国家重点实验室 ．海L=j571101) 摘 要：用限制性 内切酶从 日的基因供体质粒 pBIaACO1 切下大小约 2．3kb的f1的基 冈，将 定向连接存受体 质粒 pCAMBIA2301载体 j_=．，构建成含有 GLS基因的甜瓜ACC钣化酶反义基闲植物表达载体 pCBaACO1。采川 直接转化法将 pCB—aAC()1导入根痛农杆菌菌株 EHA1Oj，许用新构建的工程菌对普通烟草进行 r遗传转化研究。 在 Kanamycin选择压力下获得的烟草转化不定芽和完整棺株，经过 GL’S基因组织化学法检测 以及 I(、R 法‘鉴 定 ，证实了该反义基因已导人烟草基因组中。此项研究为下一阶段用该反义基因转化甜瓜品种以改良甜瓜果实耐 贮运性打下基础 。 关键词：甜瓜；ACC氧化酶 ；反义基因；植物表达载体；转化 中图分类号 ：Q943．2 文献标识码 ：A Studyon theConstructionofaVectorExpressingM elonACO1 AntisenseGeneandItsTransferencetoNicotianatabacum HUANG Yong—hong ，TAO Xing—lin ，I．U Iu · ．ZHAO Chang—zeng (1DepartmentofHorticulture．AgronomyCollege．GansuAgriculturalUniversity．1．anzhou 730070．China：一9InstituteofBi。 scienceandBiotechnology，StateKey1．aboratoryofTropicalCropsBiotechnology．ChineseAcademyofFropicalAgricultureSci ence，Haikou571101．China) Abstract：A donatorplasmidpBI—aACO1wasdigested with restriction endonucleases，then theacquired targetgeneswasligatedtorecipientplasmidpCAMBIA2301whichwasdigestedwiththesamerestriction endonucleases，andfinallyaplantexpressionvectornamedpCB—aACO1expressingmelonACO1antisense geneandGUSgenewasconstructed．M oreover，pCB—aACO 1wastransferredintoagrobacterium tumefa— cienEHA105bydirectDNA transfer Andthetransferencewith thenew engineeringbacterium toNi【r·J— tianatabacum wasstudied．Theadventitiousshootsandcompleteplantsobtainedundertheselectionpres— sureofKanamycinweredetermindedbyG(，S genewithhistochemicalmethodandconfirmedwithPCR Of genomeofN icotianatabacum