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ISSR技术在菌物研究中的应用 王金利。贺伟圆关妒 ． (％b京市林业保护站北京100029；罾北京林业大学北京100083) 变异、遗传图谱构建和抗病基因；分析遗传多样性和种群遗传结构；研究种间和种内关系；分析和 鉴定菌物种类，尤其是能用于研究无性型和有性型之间的关系，可以很好地解决分类学上的难题． 由于ISSR有简单、经济、快捷、多态性高、可重复性好等优点，逐渐在越来越多的领域应用，但在 我国还没有被广泛应用．本文概括地介绍ISSR技术的主要优点，着重介绍ISSR技术在菌物上的应 用现状，最后就应用ISSP,技术应注意的问题进行了讨论。 关键词：ISSR；分子标记；茵物；应用现状 引言 随着分子生物学的发展，手段不断更新，基于PCR的分子标记对分子生物学的发展起到了巨大 的推动作用。基于PCR的分子标记有多种，如RAPD(Random DNA)、 AmplifiedPolymorphic AFLP(AmplifiedFragment Length 有比较广泛的应用，而微卫星技术有多种变体，其中，ISSR技术是从微卫星发展而来的一种先进技 术。 ISSR标记，又称ASSR(Anchored Mierosatellite SimpleSequenceRepeat)或AMP-PCR(Anchored et 础上发展起来的，由Zietldewicza1．(1994)对ISSR首先进行了描述，即用加锚微卫星寡核苷酸 做引物，扩增微卫星重复序列间的基因组片段。此后，有很多的研究人员先后使用这种技术，并与 etal．(1996)用多种标记评估了中国高粱属34种植物的多样 mierosatellites)来命名这种技术。Yang 性和相互关系，几种标记产生的结果都有可比性，但ISSR标记相对快速、可重复性好，并且费用低。 鉴于ISSR标记在菌物上的应用较少，本文主要阐述这种技术在菌物上的应用现状。 一、在菌物遗传学中的应用 (一)遗传变异分析 微卫星引物是根据微卫星重复序列两翼的特定短序列而设计，用来扩增重复序列本身，而ISSR 引物所扩增的是两个相邻的微卫星序列之间的片段，由于重复序列之间的片段长度变化极大，所以 (即ISSR)分析了芬兰和其他国家的欧洲赤松溃疡病菌(Gremmeniellaabietina)，所得到的RAMS 标记提供了关于遗传变异的有用信息，将Gabietina分成4个有遗传差别的类型：亚洲型、北美型 大量的长度多态性等位基因，提供的信息更多。因此，Hantulaetal认为这些共显性标记的出现对于 研究双核或双倍体组织应该更有用。但Hantulaet口，(1998)将RAMS标记首次应用在双核材料上， 分析了引起欧洲赤松(Ptnus sytvestris)锈病的病原菌Peridermtumpint(Endocronartiumpint)的锈 孢子器，他们认为RAMS标记很难同时获得多个有高度变异的位点，对于双核或双倍体菌物，RAMS et 标记可能不如他们在1997年所预言的那样有效。然而，Huntula a1．(1998)发现RAMS可以鉴定杂 合程度较低的两个位点的杂合子，他们得到了用显性标记(如RAPD)不能得到的数据，这表明通 45 首届中国林业学术大会论文集 (二)群体遗传学研究 l遗传多样性研究 用RAMS和AFLP技术分析了高粱属麦角