肺癌中PI3K／AKT信号通路对Skp2调控机制的研究.pdfVIP

山东医药2010年第 50卷第 8期 肺癌中PI3K／AKT信号通路对 Skp2 调控机制的研究 解智慧，孙秀华，柯 丹 ，张洪开 ，于爱鸣 (中国医科大学，沈阳 110001) 摘要：目的 探讨肺癌中磷脂酰肌醇-3一激酶(PI3K)／AKT信号通路对 S期激酶相关蛋 白2(Skp2)的调控机制。 方法 体外培养4种类型肺癌细胞系 H460、LK2、H446和A549，经LY294002处理细胞 24h后实时RT—PCR法检测 Skp2基因表达变化；Westernblot检测E2F1蛋 白表达变化。结果 实时 RT—PCR显示 LY294002作用后4种肺肿瘤 细胞系中skp2基因表达均下降；Westernblot结果表明在小细胞肺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌中E2F1蛋白表达降低，肺 腺癌中E2F1蛋白未表达。结论 肺癌中PI3K／AKT通路可在转录水平调节 Skp2表达，在小细胞肺癌、肺鳞癌、大细 胞肺癌中此种调节可能通过转录因子E2F1发挥作用，而肺腺癌中E2F1不参与此种调节。 关键词 ：肺肿瘤；磷脂酰肌醇-3一激酶 ；S期激酶相关蛋 白2 中图分类号：R735．7；Q78 文献标志码：A 文章编号：1002—266X(2010)08-0013-03 Regulativemechanism ofPI3K／AKTsignalpathwayonSkp2 inlungcancer XIE Zhi—hui，SUN Xiu—hua，KE Dan，ZHANGHong—kai，YU Ai—ming (ChinaMedicalUniversity，Shenyang110001，P．R．China) Abstract：Objective Toinvestigatetheregulationmechanismofphosphatidylin0sitol3kinase(PI3K)／AKTpath- wayonS-phasekinaseassociatedprotein-2 (Skp2)inlungcancercells．Methods Thehumanlungcancercelllines H460，LK2，H446andA549weretreatedwithLY294002toblockthePI3Kpathway．Real—timeRT—PCRandWestern blot methodswereusedtomeasurehteexpressionofE2F1cDNAsandSk．p2 proteins．Results TheinhibitionofPI3K signal pathwaydecreasedtheexpressionofSkp2cDNAsandE2F1proteinscomparedwithcontrolgroup．Conclusion PI3K sig— halpathwayregulatestheexpressionofSkp2cDNAsthroughtranscriptionfactorE2F1in lungcancercellsH460，LK2， H446，butnotinA549celllines． Keywords：lungneoplasms；phosphatidyIinositol3kinase；S-phasekinaseassociatedprotein-2 磷脂酰肌醇一3一激酶 (PI3K)因磷酸化 AKT，进 了本研究，旨在探讨肺癌 中PI3K／AKT信号通路对 而激活或抑制其下游众多靶蛋 白，调控肺癌 的增 Skp2的详细调控机制 。 殖 、分化、凋亡及迁移。对乳腺癌及前列腺癌 的研 1 材料与方法 究表 明，PI3K／AKT可从转录、翻译、翻译后等多水 1．1 材料 肺癌 H460、LK2、H446和 A549细胞系 平增加 s期激酶相关蛋 白2(Skp2)表达 ，促进肿瘤 购于中国科学院细胞库；RPMI1640、DMEM培养 发生 ¨,2j。E2F1是第 1个从 Nalm6细胞和 Akata 基 、胰蛋 白酶购 自美国Gibco公司；小鼠抗人 13一actin 细胞 中克隆出的E2F家族 的重要成员，在控制细 单克隆抗体、HRP标记的山羊抗小鼠 IgG抗体和