高效液相色谱法测定茶条槭悬浮细胞中没食子酸含量.pdfVIP

高效液相色谱法测定茶条槭悬浮细胞中 没食子酸含量1 齐凤慧，詹亚光，董杰 东北林业大学生命科学院，哈尔滨 (150040) E-mail: yaguangzhan@163.com 摘 要：茶条槭悬浮培养细胞经过10%浓硫酸- 甲醇提取后，用HPLC 法测定其没食子酸含 量。色谱条件为：流动相为甲醇/水（4/6 ），流速0.5ml/min ，Waters C18 MS 柱，检测波长为 270nm 。实验测得的线性范围为 20.0-100µg·mL-1 （R=0.9996, n=5 ）。平均加样回收率为 99.86% ，RSD 为0.09%。样品稳定性、实验的精密度及重复性三者的RSD 均小于1.5%。表 明本法是一种测定茶条槭悬浮细胞中没食子酸含量的好方法。 关键词：茶条槭；悬浮细胞；液相色谱；没食子酸 1．引言 没食子酸(Gallic Acid, GA)，又称倍酸，五倍子酸，应用范围很广，主要用于药物、染 料、墨水制造，也用做食品抗氧剂、防腐剂、金属提取剂、紫外线吸收剂、消毒剂、止血收 敛剂、显影剂、化学试剂、泥浆流化剂和葡萄生长剂等。研究表明，以没食子酸为原料制成 [1] [2] 的药物可使肿瘤细胞的生长抑制或凋亡 ，还可作为抗氧剂，具有较强的抗氧化作用 ，在 国际医学上，以没食子酸为原料现已合成抗感染药品如四氧普林(TXP)、溴莫普林(BOP)和 美替普林(MTP)；脑复清( Exifone),用于治疗老年意识障碍；联苯双脂，用于治疗慢性肝炎； 克冠卓、忧心平、心痛平，用于心绞痛、心衰、心肌梗塞恢复期等；通牌酯,用于治疗脑血 栓；Troxipide ,用于治疗胃溃疡；克冠酸,用于治疗心肌梗塞；没食子酸锑钠,用于治疗血吸虫； 鞣花酸，用于防癌和抗癌[3] 。目前，没食子酸产品供不应求，销售价格在20～30万元/ ｔ。 茶条槭（Acer ginnala Maxim ）为槭树科槭树属的落叶灌木或小乔木，树叶中含有没食 子酸，本文前期工作已获得大量茶条槭悬浮细胞，并确定其中含有没食子酸，我们用高效液 相色谱法测定了茶条槭悬浮细胞中没食子酸含量，实验方法如下。 2. 材料与方法 2.1 材料 茶条槭悬浮培养细胞 2.2 仪器 德国Waters液相色谱系统（包括600泵、717 自动进样器、2487检测器、2996检测器、柱温 箱等），Milli-Q Gradient超纯水系统。 2.3 药品与试剂 没食子酸对照品购自中国药品生物制品检定所，甲醇（色谱纯），浓硫酸。 2.4 色谱条件 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金(20060225010)和东北林业大学青年科研基金(07045)的资助。 - 1 - 色谱柱为德国Waters C18 4.6 mm ×250 mm ，5µm；流动相为 甲醇：水（4 ：6 ）流速:0.5 -1 ml·min ；检测波长: 270 nm；进样量为10µl；柱温为25 ℃。 2.5 标准品配置 精确称取没食子酸标准品0.0050g，置于50ml 容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。 配制成0.1 mg·mL-1 的标准液。 2.6 样品处理 精密称定经100 目细胞筛筛过的茶条槭悬浮培养细胞干粉末0.1 g，精密加入2 mL10%浓硫 酸，2 mL 甲醇，超声2min ，加入甲醇定溶至5mL，60℃水浴1h，0.45µm滤膜过滤，超声10s， 进样。 3. 结果 3.1 线性关系考察 本文在优化色谱条件时，使用C18色谱柱，对流动相甲醇和水的比例以及流速进行了试 验，分别采用1：9、3 ：7、4 ：6三个比例，采用1ml/min、0.8ml/min、0.6ml/min、0.5ml/min 流速对