利用SAS软件优化丙酮丁醇梭状芽孢杆菌产丁醇的发酵条件.pdfVIP

维普资讯 FUUDANDFERMEN1AT10NINDUSTRIESJ 利用 SAS软件优化丙酮丁醇梭状芽孢杆菌产丁醇的发酵条件 刘兴旺，赵洪坤，杜连祥，路福平，邱 强 (天津市工业微生物重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 ，300222) 摘 要 通过单因素优化实验 、Plackett—Burman实验和 Box-Benhnken响应面实验对影响丙酮丁醇梭状芽孢杆 菌产丁醇能力的主要 因素进行优化 ，得到了回归方程 ：Y2—8．583367—0．002125×X7—0．4165×X +0．297 567×X9+0．070692×X1o一0．550233×X7 一0．0379×X7×X8～ 0．001775×X7×X9— 0．05375×X7×X1o + 0．037529×X8 一 0．182 675×X8×X9+ 0．032475×X8×Xlo+ 0．126754×X9 一 0．069×X9×Xlo～ 0．588208×X。。对 回归方程进行岭嵴分析，得到了丙酮丁醇梭状芽孢杆菌的优化培养条件 ，即装液量为 310 mL，种龄为 18h，静态培养 ，接种量为 6％，温度为37~C，初始 pH值 5．5，在此基础上进行 7L发酵罐扩大培养， 优化前和优化后的分批发酵结果相 比，优化后 7L罐最佳浓度 的产量为 1O．55g／L，比原产量 8．02g／L提高 了 31．25 ，比有关文献报道 的产量高出l1．64％ ]。 关键词 丙酮，丁醇 ，气相色谱 ，Plackett-Burman，Box-Benhnken，岭嵴分析 丙酮丁醇发酵是丙酮丁醇梭状芽孢杆菌 (Clos— 水，混合均匀，微沸后煮 1h成糊状，分装于 500mL tridiumacetobutylicum)在嫌氧条件下将葡萄糖代谢 三角瓶 中。 自然 pH，121℃灭菌 30min。 为丙酮 、丁醇等溶剂的生物化学过程[4]。从 20世纪 1．2．2 培养方法 20年代起 ，世界各 国就投入 了大量精力进行研究。 (1)菌种先在沸水浴下热处理 。1～2min，再于 其后，由于石油化工 的发展，丙酮以及 丁醇可 以廉价 35～39℃下厌氧培养。 地供给，该发酵法就此暂时消失。但是 ，丁醇作为一 (2)初始 pH 为 6，装液量 270mL，采用静态培 种大宗化工原料 ，市场很大 ，国内年需求量约 50万 t 养 ，接种量 10 ，温度 37℃、种龄 22h，转接至发酵培 以上 。随着石油资源 日益紧缺 ，以生物法为原料 ，发 养基 ，发酵周期为 78h。 酵法生产丙酮 、丁醇的技术重新显示 出其优势。因为 1．3 主要仪器设备 生物柴油是一种可再生的清洁能源，而向生物柴油中 HY FJ生物反应摇瓶柜 ，上海欣蕊 自动化设备 添加丁醇 ，可以有效地改善其 自身存在的燃烧性能上 有限公司 。7L发酵罐，上海高机生物工程有限公司。 的缺点 引。 高效气相色谱分析仪 ，美 国安捷伦科技公司。pH 有关采用固定化技术[6]，用糖蜜作为发酵培养 计 ，梅特勒一托利多仪器 (上海)公司 。 基Ⅲ等提高丁醇产量 的研究已均有报道 ，但丁醇产量 1．4 分析方法 都不到 lOg／L。文 中通过利用 SAS软件L】对丙酮丁 1．4．1 生物量 的测定 醇梭状芽孢杆菌产丁醇能力的培养条件进行了优化 ， 采用核酸量方法[】。]测定 。 产量有了显著 的提高。 1．4．2