T-DNA介导基因诱捕技术及其在植物功能基因组学的研究中的应用.pdfVIP

植物学通报Chinese Bulletin of Botany 2008, 25 (1): 112 120, w w w .chinbullbotany .com .专题介绍. T-DNA 介导的基因诱捕技术及其在植物功能 基因组学研究中的应用 杨珍珍, 李萍, 王崇英* 兰州大学生命科学学院, 细胞生物学研究所, 兰州 730000 摘要 T- DNA介导的基因诱捕技术是近年来发展起来的鉴定和分离基因的方法。在拟南芥和水稻基因组测序已经完成的今 天, 该技术将在两者基因功能的研究中扮演举足轻重的角色。本文就T- DNA介导的基因诱捕系统、基因克隆和突变体库构建 的研究进展及其在植物功能基因组学上的应用等内容进行了综述, 并讨论了该技术应用中的一些问题。 关键词 功能分析, 基因鉴定, 基因诱捕, 突变体库, T-DNA 杨珍珍, 李萍, 王崇英 (2008). T-DNA 介导的基因诱捕技术及其在植物功能基因组学研究中的应用. 植物学通报25 , 112 120 . 随着拟南芥和水稻基因组测序工作的完成, 功能基 随着新技术新方法的不断发展, 分析鉴定基因功能 因组学成为生物科学当前的研究热点。功能基因组学 的方法越来越多, 但最直接最有效的方法是构建饱和的 的主要研究内容包括基因的识别、鉴定和克隆, 基因结 基因突变群体, 通过突变体分析鉴定基因功能。因此突 构、表达调控、功能分析以及基因相互作用等。近些 变群体的构建是功能基因组学的基础。随着农杆菌介 年来, 利用转座子和T- DNA 作为转化载体的基因诱捕技 导的植物转基因技术的不断完善, 通过创造大量的T- 术为植物基因分离、鉴定和功能分析的研究提供了强 DNA 独立转化子来建立T- D NA 突变体库的方法已成 有力的工具。T- DNA 介导的基因诱捕技术是以T-DNA 为快速构建插入突变体库的主要方法。至今已构建了 作为转化载体, 对其进行适当修改后整合报告基因, 通过 225 000 多个拟南芥T- DNA 插入突变体, 获得了360 报告基因的表达来研究目的基因表达并进而分离、鉴 000 个T- DNA 插入位点序列, 这几乎可以代表拟南芥 定基因的一门遗传学技术。其基本原理是将含有已知 的整个基因组(Li and Zha ng , 2006) 。同样, 科学家 DNA 序列的T- DNA 载体通过转化插入到受体基因组中, 们构建了200 000 个水稻T- DNA 插入系, 这些突变体 使插入位点基因的功能缺失或获得从而造成突变, 并在 库已经比较大, 可以从中以90% 的几率找到一个特定 被诱捕序列启动子的控制下表达插入的报告基因, 以鉴 的基因(A n and Le e , 2005) 。现在利用T- DNA 突变 定可见或非可见的突变。T- D NA 不仅可作为诱变剂产 体库分离和鉴定基因功能的报道越来越多, 说明其在植 生大量突变体, 而且转化载体中的报告基因还可作为克 物功能基因组学中的应用潜力很大。目前拟南芥和水 隆整合位点内源基因的标签, 分离和鉴定突变体相关基 稻等植物的基因组测序已经完成, 人们正想尽办法将这 因。到目前为止, 通过基因诱捕已经发现了很多新基 庞大的新遗传信息与基因功能联系起来。为此本文将 因。在拟南芥已经克隆的62 0 多个有表型的突变体基 主要介绍T- D NA 介导的基因诱捕技术在植物基因分 因中, 有40% 是通过T- DNA 介导的基因诱捕技术分离 离、突变体库构建以及在功能基因组学研究中的应用 的(Meinke and Sc holl, 2003) 。 及进展。 收稿日期: 2006- 10- 24; 接受日期: 2007- 05- 15 基金项目: 国家自然科学基金(No.)和教育部