动物细胞培养物中支原体污染的检测.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiagn．Sci．2010，38(3)：1151—1153 责任编辑 王强 责任校对 卢瑶 动物细胞培养物 中支原体污染的检测 赵俊，王兴满，胡勇，陈敬贤，王明丽 (安徽医科大学微生物学教研室，安徽合肥230032) 摘要 [目的]建立检测细胞培养物中支原体快速有效的方法。[方法]从6种常见污染细胞的支原体 16sRNA中选择2段高度保守的 核酸序列作为引物，用PcR和DNA荧光染色法来检测实验室中25种动物细胞株。[结果]用DNA荧光染色法检测实验室中25种动物 细胞株 阳性率为24％，可疑阳性为16％；而用PCR法检测阳性率为36％。[结论]PCR法较DNA荧光染色法灵敏度更高、特异性更强， 将 2种方法结合应用效果更好 。 关键词 支原体 ；细胞培养 ；DNA荧光染色法；聚合酶链反应 中图分类号 $811 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2010)03—01151—03 DetectiOilofM gcoplasmeContaminatiOilinAnimalCellCulture ZHAOJunetal (TeachingandResearchSectionofMicrobiology，AnhuiMedicalUriversity，Hefei，Anhui23()032) Abstract 0『biective]rr0establisharapidandefficientmethodfordetectingthemyeoplasmacontaminationofeellcultures．1MethodITwo highlyconservednueleotidesequenceswerechosen ascoplasma primersfrom 16sRNA inthesixcommonkindsofmycoplasmacontaminated cells．PCRandDNAfluorescencestainingmethodwereselectedtodetecte25kindsofanimalscelllinesinlaboratory．IResuhI epositive rateis24％ bvDNAfluorescencestainingandthesuspiciouspositiveis16％．Thepositiverateis36％byPCR．IConclusion1ThePCRmetll— odhasahighersensitivityandagreaterspecificitythanDNA fluorescencestaining．Theeffectofthecombinedusethem isbetter． KeYwords Mycoplasma；CellCulture；DNA fluorescencestaining；Polymerasechainreaction 支原体 (Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁的原核微生物， DYCP一30型水平电泳槽。 在自然界分布十分广泛。支原体个体微小，直径约(0．1～ 1．3 DNA荧光染色法检测支原体 ①制备标本。首先，在 0．8) m，可透过一般滤膜 (0．22～0．45 m)，在细胞培养过 六孔板中制备盖玻片细胞培养物，然后将待测细胞接种到盖 程 中极易受到支原体污染。细胞培养 (特别是传代细胞)被 玻片上，用培养液培养 1～2d。采用有支原体污染的Vero细 支原体污染是世界性问题 ，在细胞培养中，支原体感染发生 胞作阳性对照，无支原体污染 的Vero细胞作 阴性对照。② 率达到30～60％…。国内外研究表明，细胞培养 中，主要有 固定。首先 ，吸出培养液，用新鲜配制的 1：3冰醋酸／甲醇固 以下几种支原体污染 ：口腔支原体 ( orale)、精氨酸支原体 定液固定 15min；然后 ，吸出固定液后重复固定一次 ；最后 ， ( arginini)、猪鼻支原体 ( hyorhinis)、发酵支原体 ( 吸除固定液室温下干燥。③染色。用pH值7．2的PBS稀释 尼 。 )、梨支原体 ( pirum)和莱氏无胆 甾原体 (A． Hoechst33258储存液 ，使终浓度为5 g／ml；然后将染液滴加 1aidlawii) 。支原体感染发生后能改变细胞的DNA／RNA