华佗健聪汤对Aβ诱导BV-2细胞释放IL-1β抑制作用的研究.pdfVIP

中国中医药科技 2010年 1月第 l7卷第 1期 Jan．2009Vo1．17No．1 ·57 · · 康复与养生 · 华佗健聪汤对 AI3诱导 BV一2细胞释放 IL一1』3抑制作用的研究* 江励华 黄 臻 段金廒 王明艳 (南京中医药大学 ·南京 210029 广州中医药大学第二附属医院 ·广州510000) 摘 要 目的：研究华佗健聪汤对邶诱导Bv一2细胞生成和释放致炎因子 IL—l的抑制作用。方法： 以BV一2细胞为材料，蜗 一诱导Bv一2细胞生成和释放致炎因子 IL一1p，中药组预先用华佗健聪汤灌胃 后获取的大鼠含药血清进行干预，E1I．SA法检测 IL一1p含量。结果：中药组 IL一1p含量显著下降，与正常 组、模型组相比均有明显差异。结论 ：华佗健聪汤显著抑制 BV一2细胞分泌 IL—lp的水平，良好 的抗炎 作用可能是华佗健聪汤防治 AD的机理之一 。 主题词 阿尔茨海默病 ／中医药疗法 @华佗健聪汤／治疗应用 血清药理学 体外研究 近年来许多研究证明p淀粉样多肽 (一amyloidpeptide， 产品，用DMSO溶解后用生理盐水稀释成合适的浓度，过滤 邸)是阿尔茨海默病 (AD)发生的始动因素。而Ap的神经毒 除菌，4~C保存备用。 作用与炎症或胶质细胞激活(特别是小胶质细胞)密切相关， 1．4 主要试剂 DMEM低糖培养基：Gibco公司产品；MTF、 小胶质细胞 (microglia，MG)激活已经被认为是 AD脑结构改 DMSO、胰酶 ：Sigma产 品；新生牛血清 ：杭州 四季青生物工程 变的特征之一。小胶质细胞广泛分布于中枢神经系统，占胶 公司产品；青链霉素：山东鲁抗医药股份有限公司产品；IL一 质细胞总数的20％。小胶质细胞及其相关炎性反应在 AD 1口ELISA试剂盒：博士德生物工程有限公司产品。 形成过程中的重要作用被越来越多的人所接受。目前国外 1．5 主要仪器 OLYMPUS倒置显微镜：日本；BIO—RAD酶 对AD的炎性反应机制已开展了多方面研究工作 ，并对 AD 联免疫检测仪：USA。 的抗炎治疗在临床上进行积极探索，取得了很大进步。 2 方法 BV一2细胞系为Blasi等…在 1990年应用携带癌基因v 2．1 BV一2细胞培养 细胞用含 10％新生牛血清的DMEM — raf／v—myc的反转录病毒 J2感染原代培养的小鼠小胶质 低糖培养基加青霉素 100U／ml、链霉素 100U／ml，置 37℃，5％ 细胞而获得的永生细胞系，该细胞系不仅高度纯化 ，而且基 c()2的培养箱内培养，每隔 1天换 1次培养液，3—4天传代 1 本具备了原代培养的小胶质细胞的形态学、表型以及各项功 次 。 能特点，相对较易培养，目前被国外许多学者所应用。华佗 2．2 分组造模、药物干预及指标检测 取对数生长期的BV 健聪汤为临床验方 (源 自江 良善老中医的医案)，为了探讨本 一 2细胞接种于6孔培养板中(密度为 5×105／~：L)，造模用的 方剂防治 AD的机理，本文研究了本方对 邶 诱导 BV一2细 一 42用 DMSO溶解后以无血清DMEM培养基稀释成 20kanol 胞生成和释放致炎因子 IL一18的抑制作用。 · L～，过滤除菌，37cc孵育 3天，置4~C冰箱保存。把种植在 1 材料 6孑L板的 BV一2细胞分成 4组 ：①正常组：不加任何处理因 1．1 细胞来源 BV一2细胞：购 自中国医科院协和医科大 素 ，换上同体积 (0．8m1)的新鲜的无血清 DMEM培养基。② 学基础医学细胞中心。 中药组 ：将含药血清加入无血清 DMEM培养基中，使其终浓 1．2 实验动物 成年 sD大鼠1O只，体重250—300g，南京 度为 10％，将此含药DMEM培养基孵育细胞24小时后弃去，