肠出血性大肠杆菌O157多重PCR快检方法地研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 2．6 P60基因在E．coli中的表达与检测 kDa处有一条与预期值大小相符特异 由图6可见．DETP60转化菌的诱导产物在约45．6 发生血清学反应，表明所表达的蛋白是特异性P60蛋白。凝胶薄层扫描结果显示，pEl甲60 3讨论 李氏杆菌属包括7个种，可归为2个群。第l群包括单核增生李氏杆菌、伊氏李氏杆菌、 韦氏李氏杆菌、塞氏李氏杆菌、无害李氏杆菌，第2群包括格氏李氏杆菌和莫氏李氏杆菌”J； 其中第l群中前两种具有致病性。单核细胞增生性李氏杆菌最初是有Mumy等人在1926 年从家兔核豚鼠体内分离得到的。它主要引起动物以脑膜脑炎、败血症和母畜流产为临床特 征的传染病。该病常散在发生，但致死率高，以早春及冬季多见。天气变化、阴雨天气、青 饲料缺乏及寄生虫感染均可诱发本病。近年来．该菌已成为一种重要的食物源中毒菌而逐 渐成为研究热点之一HJ叫。但从以往的报道来看，脑膜脑炎和败血症在临床上比较常见，母 畜流产的病例较少。本试验所用的菌株也是偶然从一只流产塔里木马鹿母畜流产的胎儿肝脏 中分离得到的． T 研究表明，在对单核细胞增生李氏杆菌的免疫反应中，分泌性的蛋白质是cD．4和CD8 细胞识别的主要抗原，其中最主要的两个保护性抗原是P60和LL口”1。P60是由 激机体B细胞和T细胞产生免疫反应的主要抗原分子。它含有Th卜Asn的重复序列区域， 同时具有水解酶和酰胺酶活性，与李氏杆菌的侵袭性相关。在本研究中，发现推导的1IA株 P60蛋白含有5个nmA铋重复序列区，推测这可能与维持该蛋白高级结构以保持其生物学 活性相关。由于目前分离到的李氏杆菌都可合成P60蛋白及其同系物”J，但不同种的李氏杆 菌编码的P60蛋白在N端和C端区域都有高度的保守性，而中间区域具有不同种的特异性， 利用其两端区域的保守性可用于该菌的PcR检测中，而中间区域的特异性又可作为PCR鉴 定不同种的依据151q。鉴于P60蛋白与李氏杆菌侵袭性、免疫原性和种属分类密切相关，本 试验开展了P60蛋白基因的克隆、序列分析及其表达研究，一方面可以了解到野毒株P60 外膜蛋白基因是否变异。另一方面在本试验中表达的P60重组蛋白与其多克隆抗体发生明显 的血清学反应，表明其具有良好的反应原性，可为上．m∞Dc脚跟∞口检测用抗原的研制奠定 基础． 参考文献略 肠出血性大肠杆菌0157多重PCR快检方法的研究 孙洋冯书章’鄣学军刘军祝令伟 (军事医学科学院军事尊匿研究所吉林长春130062) 籀要本研究针对腑出血性太肠轩茸0157：H7蝙码志贺毒素，紧密素和H7抗原的基因(m，·m2．鲋“ 和卫fcl设计引物，扩增太小不同的特异性片段，优化反应条件，建立了多重PcR方法-可用于粪便和环 境样品中EHEcOl57：H7的检测。同时能够判断目的茼毒力基因的携带情况．奉实验对待捡样本的增茵培 养也作了初步探索，通过有选择性的增茼，提高了检测的敏感性．甘人工污染的水．土壤扣粪便样品以及 实琢粪便样品进行检测，敏感性和特异性均较为理想． 关键词E眦cOl57：H7．多重PcR；检测 作者简舟：孙洋(1973．)。男，助理研兜员。预防善医学博士 +通讯作者，B珊dl：出uzII锄g迥yaII∞．∞m 人兽共患病 于1982年在美国首次报道，该菌感染后能够导致人的出血性结肠炎(HC)、溶血性尿毒综 合症(删s)和血小板减少性紫癜(1-rP)111．美国、英国、加拿大、日本、澳大利亚、德 0157感 国等地曾多次暴发流行。我国自1986年徐州首次报道以来，已出现过两次EHEC 染暴发流行，零星的散发更是时有发生．我国受此病的威胁越来越大。 对E眦C 0157的检测，目前已建立了许多分子生物学法，如PCR诊断技术和基因芯片 技术、噬菌体分型技术、脉冲场凝胶电泳分析技术以及利用单克隆抗体建立的ELlsA以及 免疫磁性分离技术等．其中在EHEC0157诊断上应用最为广泛的是PcR诊断技术，它是一 种