凡纳对虾crustin 1抗菌肽基因的克隆与性质研究.pdfVIP

2013年9月 四川师范大学学报(自然科学版) Sept．，2013 ofSichuaIlNo咖al 第36卷第5期 Joumal University(NaturalScience) V01．36．No．5 凡纳对虾c厂姗方in 1抗菌肽基因的克隆与性质研究 杜志强 (内蒙古科技大学数理与生物工程学院生物工程与技术研究所，内蒙古包头014叭0) 摘要：以凡纳对虾cMtin 1抗菌肽基因作为研究对象，对基因的序列结构进行了扩增和研究；并且，将 该基因的氨基酸序列与其他对虾的cmstin类抗菌肽的氨基酸序列进行了序列同源性以及亲缘关系分析． 同时，对Lva—cmstin1的分子结构进行了预测，理论结果将为进一步研究该基因的功能奠定基础． 关键词：凡纳对虾；抗菌肽基因；基因克隆；抗菌性质研究 中图分类号：Q786 文献标志码：A 文章编号：1001—8395(2013)05—0764—03 doi：10．3969／j．issn．1001—8395．2013．05．024 凡纳对虾也被称为南美白对虾，原产于美洲太 7)和R(5 gcaaccatgaagggcatcaag一3 平洋沿岸水域；上世纪80—90年代，在我国东南沿 cgaaaac一37)，用来扩增目的基因片段cDNA的序 海爆发了极为严重的虾类疾病的背景下，被作为一 列，获得目的基因5’和37端序列之后，通过基因序 种抗病力强的外来优良品种引入我国．凡纳对虾的 列拼接来获得完整序列．PCR反应的条件为：94℃ 体液免疫系统中，抗菌肽分子作为一种主要的体液 3min、94℃30s、54℃40s、72℃45s，35个循环； 72 min’引． 免疫的效应分子，在对抗外源性的病原微生物入侵 qc后延伸8 和侵染的过程中，发挥着直接清除的作用‘1J．本文 1．2．3重组载体的构建与序列测定参照T一载 以一种被称为cM￡讯l的抗菌肽基因作为研究对 体PCR产物克隆试剂盒的使用说明将勘n—c础￡流1 象，克隆该基因的cDNA序列，并且对基因序列的 基因片段克隆到T一载体中，通过热激法将重组子转 同源性、分子进化上的亲缘关系、结构预测等进行 化到DH5旺宿主菌感受态细胞中，蓝白斑筛选之后， 3． 了分析． 将阳性克隆子送往测序公司，进行序列测定’5 V二l…dtmri：‘。111f7：+i’‘：， f．t ’j ：i!=1j¨1t 4t二。：!一!ti+t．