菜豆几丁质酶、烟草葡聚糖酶基因的分离克隆及双价表达载体的构建.pdfVIP

第23卷 第6期 云南农业大学学报 Vol|23 No．6 2008正 l1月 JournalofYunnanAgriculturalUniversity NOV．2008 菜豆几丁质酶、烟草葡聚糖酶基 因的 分离克隆及双价表达载体 的构建木 晏慧君 ，张 婷 ，杨春梅 ，于丽霞 ，张宝琼 ，李 涵 ’ (1．云南省农业科学院花卉研究所，云南 昆明650205；2．云南省花卉技术工程中心，云南 昆明650205； 3．西南林学院植物保护学院，云南 昆明650224；4．云南农业大学园林园艺学院，云南 昆明650201) 摘要：几丁质酶基因 (Chitinase，Chi)和葡聚糖酶基因 (B一1，3-glucanase，Glu)具有协同抗真菌作用，根据 GenBank号M13968，X53600分别设计引物，经RT—PCR扩增 ，克隆菜豆 Chi基因和烟草 Glu基因，将两个 目 的基因分别连上CaMV35S启动子和终止子Nos，然后串联在一起共同组建于一个表达载体pBI121中，重组表 达质粒经过限制性酶切分析鉴定，结果表明含有双价抗真菌基因的植物重组表达载体已构建成功。为非洲菊、 香石竹等花卉抗真菌基因工程育种奠定了基础。 关键词：几丁质酶；葡聚糖，pBI121，双价表达载体 中图分类号：S336 文献标识码：A 文章编号：1004—390X (2008)05—0867—06 CloningandConstruction ofBivalentExpression VectorofChiandGluGenesRespectively in Bean andTobacco YANHui—jun ，ZHANGTing一，YANGChun—mei ， YU Li—xia ，一．ZHANG Bao．qiong ，LIHan， (1．FlowerResearchInstituteofYunnanAgriculturalAcademySciences，Kunming650205，China； 2．YunnanFlowerResearchandDevelopmentCenter，Kunming650205，China； 3．FacultyofConservationBiologyofSouthwestForestryUniversity，Kunming650224，China； 4．FacultyofLandscapeandHorticutureYunnanAgriculturalUniversity，Kunming650201，China) Abstract：Chitinase(Chi)and13—1，3一glucanase(Glu)aretwofactorswithsynogesticeffectsin— volvedinanti—fungussystem．BasedonthecDNA sequenceofChi，Glugenesfrom beanandtobacco inGenBankaccessionnumberM13968andX53600，respectively，thebean I-Chitinase(Chi)and 31—1，3一Glucanase(Glu)cDNA withCaMV35spromoterandNosterminatorwereclonedinto pBI121．TheplantbivalentexpressionvectorpB—Chi—Gluwasobtainedand confirmedwith restriction enzymedigestion，whichcouldbeutilizedforfungusresistantbreedingexploitinginGerberajamesonii andCarnationgeneengineering