堆形艾美耳球虫巨噬细胞移动抑制因子的克隆和表达.pdfVIP

第30卷 第 11期 中 国 预 防 兽 医 学 报 VO1．30．NO．11 2008 年 l1月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine NOV． 2008 堆形艾美耳球虫巨噬细胞移动抑制因子的克隆和表达 阎晓菲 一，韩红玉 ，黄 兵 ，岳 城 ，赵其平 ，姜连连 ，董 辉 ，卞庆松 ，张建哲 (1．中国农业科学院上海兽医研究所 ／农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海200240； 2．新疆农业大学动物医学学院，新疆 乌鲁木齐830052) 摘 要：本研究扩增和克隆了堆形艾美耳球虫巨噬细胞移动抑制因子，并在大肠杆菌中表达出MIF重组蛋 白。根据 GenBank中的MIFmRNA序列 ，设计特异 引物，采用PCR方法以堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文 库为模板扩增获得 MIF基因，将MIF基因片段连接到原核表达载体 pET一28a )，构建重组表达质粒pET28a— MIF，并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达，对表达产物进行Westernblot分析。结果从堆形艾美耳球虫孢子化 卵囊 cDNA文库中扩增 出MIF基 因片段 ，长度为709bp；经序列分析 ，扩增片段 的核苷酸序列与GenBank中登 录的MIF序列的同源性为99．5％；经SDS—PAGE检测表明重组质粒pET(28a)．MIF在大肠杆菌中以包涵体形式表 达；Westernblot分析证明堆形艾美耳球 虫抗血清可与重组表达蛋 白特异性结合。本研究结果为进一步研究该基 因的功能奠定 了基础 、 关键词 ：球虫；堆形艾美耳球虫；巨噬细胞移动抑制因子；克隆；表达 中图分类号 ：$852．723 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—0589(2008)l1。0856—05 Cloningandexpressionofmacrophagemigration inhibitoryfactorfrOm Eimeriaacervulina YAN Xiao-fei一，HANHong—yu，HUANGBing，YUEChenga，ZHAOQi．ping， JIANGLian—lian，DONGHui，BIAN Qing—song，ZHANGJian—zhe (1ShanghaiVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculutralSciences，KeyLaboratoryofAnimalParasitologyofMinistry ofAgriculutre，Shanghai200240，China；2．CollegeofAnimalMedicine，XinjiangAgriculturalUniversity，Urumchi830052，China) Abstract：Themacrophagemigrationinhibitoryfactor(MIF)ofEimeriaacervulinawereamplifiedbyPCRfromthecDNA library ofE．acervulinasporulatedoocystsandclonedintoprokaryoticexpressionvectorpET28a(+)．Therecombinantplasmidwas *Correspondingauthor 收稿 日期：2008．0720 基金项目：国家高技术研究发展计划项 目(2006AA10A207—1)；国家科技基础条件平台建设项 目(2005DKA21104) 作者简介：阎晓菲(1983～)，女，山东潍坊人，硕士研究生 ，主要从事球虫生物学研究． 通讯作者：E-mail：huangbing232@163．com 【14]WeiX，DeckerJM ，W angS，eta1．Antibodyneutralizationand [17]MarthasM L，RamosRA，