棉花对棉蚜诱导防卫中POD同工酶基因表达的分析.pdfVIP

棉花对棉蚜诱导防卫中POD 同工酶基因表达的分析① 李彩霞 李润植 (山西农业大学农业生物工程研究中心 太谷030801) 季道藩 (浙江大学 农学系 杭州 310029) 摘要 本文分析了棉花对棉蚜刺吸胁迫的诱导防卫中过氧化物酶(POD)同工酶基 因表达特征。结果表明，受棉蚜刺吸胁迫后，棉叶组织POD同工酶不仅原有部分酶带表达 抗蚜品种棉叶组织这两种酸性PODmRNA表达明显增大，胁迫后36～48h达最大峰值。相 反，感蚜品种棉叶组织中未检测到其表达。这两种酸性PODmRNA在棉苗直接受胁迫叶和 未直接受胁迫叶中表达模式不同，预示着二者参与棉株对棉蚜诱导防卫的功能有差异。 关键词棉花棉蚜过氧化物同工酶基因表达诱导防卫 多数高等植物都具有多种POD同工酶，例如烟草和番茄各至少有12个同工酶分子。一些 POD同工酶分子具有组织及发育特异表达，或可被外界刺激诱导表达。POD活性常受低 温、重金属、干旱、创伤、病原菌和植食性昆虫侵害等因子影响发生明显改变，常被作为 植物对环境胁迫反应的指示信号。然而，对POD功能的认识多基于体外实验所获得的间接 证据。在植物的各种生理及对环境胁迫反应中，POD同工酶表达模式较为复杂，植物体内 工酶分子在活体中的特定功能。采用重组DNA及分子杂交等分子生物学技术克隆POD同 工酶基因和检测其表达则为深入探讨POD同工酶在植物生长发育及环境胁迫反应中的精 ①国家“863”计划青年科学基金和山西省留学归国人员基金项目。 大麦、小麦、水稻、马铃薯和寸薯等作物。 我们先前的实验证实．在棉花对棉蚜胁迫诱导防卫反应中，POD活性变化最显著．其 时空变化模式可用于棉花品种抗蚜性强弱的鉴定。我们依据植物POD酶基因保守区相似序 列设计引物，采用PCR从棉花叶片组织的cDNA文库中筛选到2个与棉花诱导防卫密切相 关的c mRNA时空表达的研究结果，并分析了棉叶组织POD同工酶 胁迫前后，棉叶组织中POD 谱变化．及其与棉花品种抗蚜性的关系。 L■材料与方法 1．1供试棉花品种及处理抗蚜品种晋棉13和中棉所21，感蚜品种BR—S一10和莎24—3。 温室内花盆种植，每盆2株，其中一株为处理，另一株为对照。以4叶期棉苗为实验系统， 处理株接棉蚜40头／株，每叶10头，对照株不接蚜。用尼龙网罩住处理株和对照株以防天 敌及其他害虫侵扰。处理株连续受棉蚜取食胁迫4天时，分别从处理株和对照株取样，做 POD同工酶电泳分析。为检测POD同工酶mRNA在棉蚜胁迫条件下的时空表达模式及动 态变化，处理株仅做局部胁迫处理。使处理株之一叶片(第3真叶)受棉蚜直接取食胁迫 4天，其间每12h取样。分别取处理株上直接受棉蚜胁迫处理的叶片和未受直接胁迫的叶片 (即第2和第4真叶)，同时取对照株相应位置叶片进行测试分析。 I．2 Life Sciences，uK)及其软件 色。电泳结果采用uVP凝胶成像扫描分析系统(Cambridge GelworkslD进行有关参数分柝处理。 1．3 tractmRNAIsolation 法制备，用[a一32P]dATP(h)mega)标记。 液闪计数器检测膜上所结合的比活性。 团结果与分析 2．1 棉蚜胁迫前后，POD同工酶谱的差异表达及其与品种抗蚜性的关系图l和表1结 果表明，受棉蚜刺吸胁迫前，棉叶组织POD同工酶谱带各品种间有不同，但与抗蚜性高低 无明显相关性。在棉蚜胁迫后POD同工酶谱带变化模式为：①抗蚜品种新增2条带(编号 为8、9)，且表达量大。感蚜品种仅1条新增带(编号8)，且表达量低。棉蚜诱导产生的 两条新带均为酸性POD同工酶，其P1分别为3．8和4．5；②抗、感蚜品种除第4和5两条 酶带表达量变化不明显外，其余7条酶带表达量明显增加。由此可见，棉蚜刺吸胁迫不仅 促使棉叶组织中原有部分POD同工酶基因表达量增加，而且诱导棉叶产生新的POD同工 酶分子，即激活与防卫相关的酸性POD同工酶基因的表达。从而使POD同工酶参与的诱 导防卫功能提高，这种效应在抗蚜品种中尤为明显。