双孢蘑菇A41基因组文库的构建及筛选.pdfVIP

★用蕾 全国第六届食用苗学术研讨会论文集 2呻l(增刊) 双孢蘑菇A41基因组文库的构建及筛选’ 陈美元 王泽生 廖剑华 郭仲杰 卢政辉 李洪荣 (福建省轻工业研究所，福州350005) 摘要：双抱蘑菇丛生菌株A41基因组DNA用铀u3AI都分 供，现保存于福建省蘑菇菌种研究推广站． 酶切后克废到EMBL3蕈体中．杓建了诫菌株的基因组文· 1_2试剂 库．其清度为2．2×105p“／m【．插^片段平均长度为12． 6Kb．用地高辛标记的DLDH【二氢硫辛酰胺聪氯酶)基园 基因组克隆与包装试荆盘购自美国Promoga公 探针对渡文库进行缔选井获得一阳性克鹰．经鉴定其插^ 司．地高辛标记与检测试剂盒、尼龙膜购自德国 片段约8．5Kb． BOEHRINGER MANNHEIM公司，DNA纯化试剂 差t堋一矾孢曾菇；基因蛆文库；掏建；筛选；DLDH 3AI、saIl、T4DNA 盒、sau L19ase、RNaseA、DNaseI 双孢蘑菇具有重要的经挤价值和很高的营养价 及其它试剂均购自上海生工生物工程技术服务有甩 公司． 值．被誉为二十一世纪的健康食品，国际年产量达到 1 3基园组DNA提取 300多万吨．是世界上最大宗的食用菌一对它的研究 按sylvan公司提供的方法并加以改进．10克新 最多，其育种也已深^到分子水平。近年来t国内外 鲜菇盖组织置滤纸中挤于水分，加液氟磨碎一粉末穆 对双孢蘑菇分子遗传学方而的研究有了较显著的进 人l5m1预拎的抽提缓冲液(100mMTris—Cl，pH8． 展一1．成果主要集中在遗传标记、重复序列、转座子、 orT-MNaH9D3) 0：5DmMEDTA‘500mMNaCI{2 系统发育、连锁分析、基因克隆、遗传转化等方面．就 2ml 中．旋祸振荡．加A 10蟛sDS．充分混合．在 国内而肓，本所发现了与菌株产质量性状相关的同 5M 65 KOAc．再次混合均 C保温15min，加^5mI 工酶和RAPD标记”’“，克隆了与丛生变异相关的 匀．雄上放置20min．130009离心20min后．上清通 DNA片段…．井对昌内种植最广的AS2796进行了 过两层纱布滤Aloml异丙醇中，沉淀的棱酸用消毒 家系的分子遗传分析㈠；厦门大学与我所合作克隆 玻棒缠绕出来．70％乙醇洗一次．空气中稍加干爆后 了一个质量相关DNA片段与几个耐热相关的基因