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药物与血清蛋白结合的毛细管前沿分析 周能+ 玉林师范学院广西玉林537000 大，呈现典型的CE．FA色谱，由此测定的结合参数与超滤法有较好的可比性。HZ的迁移速率比BSA 快得多，而FU的迁移速率比BSA慢得多，由CE-FA测定二者的结合参数与经典的超滤法相差很大。 说明应用CE．FA测定药物与蛋白结合时应加以注意。 小分子与血清蛋白的结合作用的色谱研究方法主要包括高效液相色谱法(眦)和毛细管电泳 法(CE)。其中HPLC法主要有前沿分析法和蛋白作为固定相的分析方法，而CE方法则非常丰富， 是目前研究小分子与大分子(蛋白，核酸等)相互作用的主要手段，方法主要包括，亲和毛细管电 泳法(V-ACE)等。本文利用毛细管前沿分析法对几种药物与BSA的结合作用进行了研究。 1实验部分 1．1仪器与试剂 彩陆毛细管电泳系统(北京，中科院化学所)，配紫外检测器和HW-001色谱工作站(中国，千 谱软件有限公司)；未涂层石英毛细管，52 LFILTER 维公司)；超滤管，截留分子量15000(PAI (湘仪)；精密天平(Sartorius)，pHS．3酸度计(上海雷磁)。 牛血清白蛋白(Roche，分子量以66．5kDa计算)，以水配成2X10巧mol／L的溶液，4C保存备用； 18 of B一甘草次酸(GA，≥97％，Fluka，productSpain)二水磷酸二氢钠(河南焦作)，盐酸(湖南师 范大学化学试剂厂)，均为分析纯。 1．2实验方法 160gtM，再 一系列BSA溶液中(20，30，35，40，45，50，55，60laM)，加入等量的GA 加入缓冲至lmL，涡旋混合30s。然后在36℃水浴加热孵化2h，再于室温下平衡2h。若要进行超滤， 则于室温平衡后进行，即取适量平衡液于超滤管，然后16000r／min下进行分离，滤液由CE进行测 定。试样重复两份，结果取平均值，毛细管电泳在室温下进行。FU和HZ方法相似。 7．40，67 CE运行缓冲是pH mM的磷酸钠，由适量的二水磷酸二氢钠溶解于水，然后在pH计 M 上用2 NaOH调节到指定的酸度，再经过0．45Ilm滤膜过滤。BSA储备液(200mM)是通过溶解 适量的BSA粉末于运行缓冲中得到，并于4度冰箱保存。工作蛋白由储备液用运行缓冲稀释而得。 药物储备液(2mM)由运行缓冲配制，内含30％(v／v)以下甲醇。药物工作液由其储备液通过运 行缓冲稀释而得，其中甲醇含量小于3％(v／v)。药物的标准溶液也用于配制其校准曲线。所有测试 溶液在应用前进行脱气。 ’周能，博士，副教授，Email：2818619@163．tom ·46· 2结果与讨论 2)．由CE—FA测定二者的结合参数与经典的超滤法相差报大。说明应用CE．FA测定药物与蛋白结合 时应加以注意。 Fi91口∞口口曲eIo口蚰BofGA—BSA．I岍tea∞Iu曲∞containedl60#M u p 254呷and kV M．2，加uM．3，50M)删UV出删衄啪s聊f叩n耐at aptlliedw∞19 voltage 『_～}一。 卜1——1——]■—_r——丁 Time(mh) coⅡtained Hg2踟唧hef雌r柚sofKT—BSA0en)蛐dFU-BSA伍ght)陆}区岫∞t耐∞Iubom20’¨MBSAwith