医用化学 教学课件 作者 张威李明梅 主编 第十三章 紫外 可见分光光度法.pptVIP

尚辅网 尚辅网 第十三章 紫外-可见分光光度法 学习目标 1.掌握光吸收定律的一些基本概念、成立条件、影响因素及有关计算；单组分定量的各种方法。 2.熟悉紫外-可见吸收光谱的基本概念，产生的原因、特征；紫外-可见分光光度计的基本部件、工作原理及几种光路类型；用紫外-可见分光光度法对化合物进行定性鉴别的方法，以及各种测量条件的选择。 3.了解紫外-可见分光光度法用于多组分定量的方法。 紫外-可见吸收光谱法 紫外-可见吸收光谱是分子中某些价电子吸收了波长处于200-800nm范围内的电磁波，由低能级跃近到高能级而产生的一种光谱。 第一节紫外-可见分光光度法的基本原理 第一节紫外-可见分光光度法的基本原理 一、物质对光的选择性吸收 单色光：具有单一波长的光。 复合光：由不同波长组成的光。 一、物质对光的选择性吸收 日光中的白色由多种色光混合而成，另外，将两种适当的色光按一定强度比例混合后，也可以成为白光，这两种色光就互称为补色光。 一、物质对光的选择性吸收 根据量子理论，物质的粒子处于特定不连续的能级上。 例13-1 （1）透光率T为50%，其吸光度A为多少？（2）吸光度A为0.7，其透光率T为多少？ 解：（1）透光率T=0.50，其吸光度为 A=－lgT=－lg0.50=0.3 （2）吸光度A=0.7，其透光率为 T=10－A=10－0.7=0.20=20% 例13-2 用氯霉素（分子量为323.15）纯品配制100mL含2.00mg的溶液，以1cm厚的比色皿为吸收池，在波长为278nm处测得其透射率为24.30%，试计算氯霉素在278nm波长处的摩尔吸光系数和比吸光系数。 解： λ=278nm M=323.15g/mol c=2.00×10-3% T=24.30% 根据： 第二节紫外-可见分光光度计及分析方法 第二节紫外-可见分光光度计及分析方法 2.单色器 是从复合光中分出单色光的光学装置。其核心组件为色散元件，常见的色散元件有棱镜和光栅。 3.吸收池 亦称比色皿，石英或玻璃制成，用来盛放待测溶液和参比溶液。石英池适用于可见光区及紫外光区，玻璃吸收池只能用于可见光区。 4.检测器 检测光信号的装置。 如：光电池，光电管、光电倍增管等 5.信号处理系统 记录信号并进行处理的装置 例如：连接在仪器上的微型计算机 3. 显色产物稳定 显色反应产物应有一定的稳定性 4.显色剂的对照性要高 显色剂的颜色应与显色反应产物的颜色有较大区分，最好在测定波长处无吸收 2.入射光波长的选择 通常选择最强吸收峰的最大吸收波长λmax为入射波长。在该波长处，吸收度大，灵敏度较高 如在该波长有干扰，可选次强吸收峰的最大吸收波长λmax 为吸收波长 1.单一组分的测定 （1）标准曲线法 首先，配制一系列浓度不同的标准溶液，在同一条件下分别测量它们的吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制A-c标准曲线。在相同条件下测定样品溶液的吸光度，根据吸光度从标准曲线或从回归方程求得样品溶液的浓度。制作标准曲线时，注意标准溶液浓度范围应选择在待测溶液的浓度附近。 （1）标准曲线法 1.单一组分的测定 （2）吸光系数法 查得吸光系数后根据吸光度求得样品浓度 1.单一组分的测定 （3）标准对比法 相同条件下，分别配制待测溶液X和标准溶液S，并分别测定吸光度。根据郎伯-比尔定律，可得： 尚辅网 二、测定条件的选择 （二）仪器测量条件的选择 1.吸光度范围的选择 当吸光度A在0.2～0.7范围内时，实验的测量误差较小。此时相应透光率范围为65%～20% 尚辅网 尚辅网 三、定性和定量分析方法 紫外-可见分光光度法可对多种物质定性、定量和结构分析，应用广泛。 尚辅网 （一）定性分析 1.光谱一致性比较 同样条件下测定待测物和标准物的吸收光谱，如果两者吸收光谱一样，可认为是同一物质。 如无标准物，也可比较标准谱图集里的光谱。 尚辅网 （一）定性分析 2.吸收光谱特征数据比较 最大吸收波长λmax和吸光系数εmax 、 ，是用于定性鉴别的重要光谱数据。 3.吸光度（或吸光系数）比值的