基于TaqMan-MGB探针FQ-PCR对鸭瘟弱毒苗在皮下注射及其同居鸭体内侵染、增殖和排泄规律研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第八次学术研讨会论文集(2006年广州) 内侵染、增殖和排泄规律研究 齐雪峰L2，程安春1，，，汪铭书L2，杨晓燕1邡，郭宇飞12,陈孝跃1 (1．四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心，四川雅安625014．2．动物疾病与人类健康四川省重点实验 室，四川雅安625014；3．大理学院生命科学与化学院，云南大理671000；) rain、60 min、90rain及 时荧光定量PCR(FQ．PCR)对免疫鸭和同居鸭(第12h开始)第lOmin、30 回盲处、血液、气管、气管分泌液、食管及其分泌液、十二指肠、空肠、回肠、肓肠、直肠及各肠 检测到DPVoDNA 居组：除回肠分泌液的其它所有受检样品均于12h检测到DPV-DNA，其中肾(脑、气管液和食道液) 24h达到最高。综上，免疫鸭和同居鸭于免疫早期在包括主要免疫器官在内的各实质器官中的 DPV-DNA拷贝数均达到最高是DPV弱毒苗迅速产生免疫力的主要原因。DPV在免疫鸭肠道内的快 速分布和增殖并持续向外大量排毒，对免疫鸭免疫效果的增强及对免疫鸭和同居鸭黏膜免疫的产生 具有重要意义。 关键词：TaqMan·MGB探针；实时荧光定量PCR)DPV弱毒苗：鸭 viral 鸭瘟(duck enteritis，DVE)，是由鸭瘟病毒(duck plague，DP)又称鸭病毒性肠炎(duck plague 等首次报道家鸭爆发鸭瘟后，各养鸭国家和地区都有该病的发生和流行，是目前对世界范围水禽危 害最为严重的疫病之一。临床和实验室证实DPV弱毒疫苗是预防控制鸭瘟的有效生物制剂，在各养 鸭国家得到广泛的应用，其通过肌肉或皮下注射是使鸭最快获得免疫力的有效免疫途径，免疫鸭后通 常只需几个小时对接种鸭就呈现一定程度保护力。FQ．PCR技术是一种对DNA模板进行定量分析的新 技术，可对DNA进行实时、准确定量，具有灵敏度高、特异性强、高通量、自动化程度高、无污染 定性和定量最为精确的方法。活疫苗在动物体内的分布规律是阐明疫苗免疫机理的重要基础，而目前 同居鸭体内的DPV含量、分布和增殖规律进行定量检测，所获试验数据为阐明DPV弱毒疫苗的免疫 机理具有重要的意义，同时为进一步合理、有效利用疫苗防制鸭瘟提供依据。 1材料和方法 1．1实验毒株DPV弱毒Cha株本实验室保存。 部“新世纪优秀人才支持计划”项目(NCET-04．0906)和四川省重点建设学科项目(SZD0418)． 作者简介：齐雪峰(1977一)，男。蒙古族，内蒙古赤峰人，博士研究生，从事家禽黏膜免疫研究工作． 587 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第八次学术研讨会论文集(2006年广州) Ex R—PCRVersion I．2试剂定量PCR热启动酶：TaKaRa 2．1(批号购白大连宝 TaqTM 1．3实验鸭20日龄樱桃谷鸭，ELISA检测DPV抗体为阴性，PCR检测血液DPV阴性。 1．4引物设计与合成参照文献设计TaqMan．MGB探针和引物，由上海生工生物工程有限公司设计合 成。 ①引物上游引物： 5’．T]盯TccTCCTccTcGcTGAGT-3’，下游引物： 5’．ACTTCTGcAAAcccGGcc．3，，上下游引物扩增长度为 ②探针： 60bp。 5’一FAM．CCCTGGGTACAAGCG．MGB．3’。