超高压液相色谱-电喷雾串联质谱法 - 39康复网.pdfVIP

超高压液相色谱-电喷雾串联质谱法测定饲料中三聚氰胺 高丽萍 潘红锋 蔡增轩 任一平 浙江省疾病预防控制中心 中国浙江省杭州 310009 【摘要】 本实验采用超高压液相色谱- 电喷雾串联四级杆质谱（UPLC-MS/MS ）法，以多 离子反应监测（MRM ）为扫描方式，通过对样品预处理、色谱条件、质谱参数等的摸索与 优化，建立了一种简单、快速并且可靠的检测饲料中三聚氰胺的方法。本实验采用AcQuity UPLCTM BEH C18 (100×2.1mm I.D., 1.7µm) 分离柱，水和甲醇为流动相。该方法灵敏高，稳 定性和准确度均较好，经方法鉴定实验，三聚氰胺定量限（LOQ ）为5.0μg/kg （进样量10μL ）； 通过校正曲线作回归方程，在 10～300ng/ml浓度范围内线性关系良好，相关系数r2 为 0.99 ； 日内精密度RSD值为 6.98%，日间精密度RSD值为 5.96 ％；回收率为 90～100%。本实验并 对基质抑制效应作了一定研究。 【关键词】 UPLC-MS/MS ，三聚氰胺，动物饲料 1. 前言 三聚氰胺(melamine)简称三胺, 学名三氨三嗪, 别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺, 是一种 重要的氮杂环有机化工原料。三聚氰胺分子式为 C3N6H6，结构式见图 1，呈弱碱性，能溶 解于甘油、吡啶、热乙二醇、乙酸、甲醛等有机溶剂，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐。 在强酸和强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰胺二酰胺，三聚 氰胺一酰胺和三聚氰酸，在某些微生物的代谢下，也能发生上述反应。 NH2 N NH2 N N NH2 图 1 三聚氰胺(melamine) 三聚氰胺作为一种塑料化工常用材料，作为食品添加剂并没有实际作用，更没有任何营 养价值。但因其一个碳原子上含有 3 个氮，而普通蛋白质中一个碳原子上仅含有一个氮，目 前我们所常用的测蛋白质含量方法为定氮法，是通过测定氮原子含量来推算蛋白质含量。因 此食品中添加此种物质可以“提高”蛋白质含量，从而降低生产成本，达到盈利的目的。 2007 年 3 月, 美国发生宠物食用含有三聚氰胺的食品导致死亡的事件，2007 年 4 月， FDA 公布了 HPLC-UV 和 GC-MS 检测三聚氰胺的方法。近日，在美国加利福尼亚斯坦尼斯 洛斯郡的一个农场的饲养猪的尿液里发现了化学成分三聚氰胺。同时，在猫、狗食用宠物饲 料后中毒死亡的案例中，从回收的产品主原料小麦蛋白，以及病猫尿液及肾脏中也化验出了 该物质。目前，尚未确定三聚氰胺到底存在怎样的毒性，但是它确实能够使动物肾衰竭和肾 结石并导致死亡。在喂养宠物饲料的老鼠体内发现的肾结石的主要成分就是三聚氰胺和尿 酸，三聚氰胺就形成于尿素，因此三聚氰胺禁止用于宠物食品及动物饲料。同时，该物质也 可能通过食物链影响人体的健康。 美国食品和药物管理局证实，在小麦蛋白、大米浓缩蛋白以及南非的玉米蛋白中都发现 了三聚氰胺，而这些都是从我国进口的宠物粮原料。该问题引起了美国的强烈关注，也在中 国境内造成了不小的波澜，这将在一定程度上影响我国农作物和宠物粮原料的出口贸易。因 此，为了严格控制宠物饲料的品质，有必要建立一种准确测定食品中三聚氰胺含量的方法。 现有的三聚氰胺测定方法主要有光谱法（Spectroscopy）、色谱法（Chromatographic ）和 色谱-质谱（Chromatographic-MS ）联用检测法等。 1995 年Martine L. Scheepers等[1]运用拉曼光谱法分析了三聚氰胺甲醛树脂中三种三聚氰 胺成分，且样品不需要任何前处理。 高效液相色谱（HPLC ）结合紫外检测器法因其灵敏度高、自动化程度高、检测限低等 优点在国际上得到了最为广泛的应用。1990 年Takiko Sugita[2]用HPLC-UV法检测了三聚氰胺 及其三种代谢产物。采用Zorbax氨基柱(25cm×4.6mm I.D. ，5μm)，以水